不同劑量1,25-(OH)2D3對(duì)哮喘小鼠肺內(nèi)HMGB1及IL-17表達(dá)的影響.pdf

1、支氣管哮喘（以下簡(jiǎn)稱哮喘）是兒童時(shí)期最常見的以氣道慢性炎癥為主要特征的異質(zhì)性疾病[1]。既往研究認(rèn)為嗜酸性粒細(xì)胞是哮喘的主要炎癥細(xì)胞，以Th2細(xì)胞占主導(dǎo)地位的 Th1和Th2細(xì)胞比例和功能失衡是哮喘發(fā)生的免疫學(xué)基礎(chǔ)。絕大部分哮喘患者經(jīng)過以吸入糖皮質(zhì)激素（ICS）為基礎(chǔ)的階梯式規(guī)范化治療可達(dá)到臨床控制，但仍有部分患者治療效果欠佳，甚至出現(xiàn)病情惡化。隨著對(duì)哮喘發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，有學(xué)者提出單純依靠Thl/Th2失平衡理論尚不能完全闡明哮

2、喘的發(fā)病機(jī)理。隨著免疫學(xué)研究的不斷深入，最近發(fā)現(xiàn)一種新的效應(yīng)性Th細(xì)胞亞群，因其能特異性地釋放IL-17，被稱為Th17細(xì)胞亞群，并提出了Thl7/Treg失衡學(xué)說。另有學(xué)者提出哮喘患者可能同時(shí)存在Thl/Th2失衡與Thl7/Treg失衡[2]。隨著對(duì)哮喘研究的不斷深入，人們對(duì)其認(rèn)識(shí)也在逐漸提高，但哮喘發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，至今尚不能完全闡明，現(xiàn)仍是人們研究的熱點(diǎn)問題。
　　高遷移率族蛋白B1（high mobility group

3、 box1,HMGB1）是一種普遍存在的非組蛋白核蛋白，作為一種促炎因子，通過與TLR2等受體結(jié)合發(fā)揮著對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用,參與多種炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展[3]。 HMGB1出現(xiàn)較晚且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，拓寬了哮喘和其他炎癥性疾病以及自身免疫性疾病治療的窗口期，因而，針對(duì)性的靶向治療HNGB1有可能成為哮喘防治的新方向。
　　1,25-(OH)2D3是體內(nèi)最具有活性的維生素D存在形式，可通過與多種免疫細(xì)胞

4、上的維生素D受體結(jié)合，發(fā)揮對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于1,25-(OH)2D3在哮喘中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的相關(guān)機(jī)制及在何種劑量下可發(fā)揮對(duì)哮喘的免疫調(diào)控作用鮮有報(bào)道。為此，本實(shí)驗(yàn)擬通過建立小鼠哮喘模型，給予不同劑量1,25-( OH)2D3進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)哮喘小鼠肺組織內(nèi)HMGB1、IL-17的表達(dá)及氣道重塑的影響，以探求哮喘的發(fā)病機(jī)制，并尋找1,25-(OH)2D3治療哮喘的合適劑量，力求為哮喘患者提供安全有效的新型藥物。

5、r>　　研究目的
　　本研究通過卵蛋白致敏和激發(fā)建立哮喘小鼠動(dòng)物模型，給予腹腔內(nèi)注射不同劑量1,25-(OH)2D3進(jìn)行干預(yù)。通過觀察并測(cè)量各組小鼠氣道壁厚度，檢測(cè)肺組織內(nèi)HMGB1及IL-17表達(dá)量的改變，以探討HMGB1及IL-17在哮喘中的作用，以及不同劑量1,25-(OH)2D3對(duì)哮喘小鼠氣道重塑和肺組織內(nèi)HMGB1及IL-17表達(dá)的影響。目的是為了從新的角度認(rèn)識(shí)哮喘的發(fā)病機(jī)制，并探求1,25-( OH)2D3影響哮喘的作

6、用機(jī)理及其合適劑量，力求為哮喘的長(zhǎng)期管理提供新的思路和方法。
　　研究方法
　　將50只6-8周齡雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。哮喘組、低劑量組、中劑量組和高劑量組分別在第1、8、15天給予卵白蛋白(OVA)和氫氧化鋁抗原混合液腹腔內(nèi)注射致敏建立哮喘小鼠模型，對(duì)照組給予腹腔內(nèi)注射等體積生理鹽水替代；從第22天至第35天，采用1％OVA霧化吸入進(jìn)行激發(fā)，每日一次，每次30 min。在每次激發(fā)前30 min，低劑

7、量組、中劑量組、高劑量組依次按1μg/kg、4μg/kg、10μg/kg給予腹腔內(nèi)注射1,25-(OH)2D3混合液進(jìn)行干預(yù)，哮喘組則以腹腔內(nèi)注射等體積生理鹽水替代；對(duì)照組霧化前30min腹腔內(nèi)注射和霧化吸入均采用等體積生理鹽水替代。各組小鼠于末次霧化激發(fā)結(jié)束后24 h內(nèi)制備肺組織標(biāo)本。采用蘇木精-伊紅染色觀察小鼠肺組織氣道炎癥和結(jié)構(gòu)變化，免疫組化染色測(cè)定HMGB1、IL-17表達(dá)的水平， RT-PCR從mRNA水平檢測(cè)HMGB1及IL

8、-17基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)果
　　1．反復(fù)致敏及激發(fā)后，哮喘組小鼠出現(xiàn)喘息的典型發(fā)作，表現(xiàn)為口唇紫紺、呼吸急促、弓背直立、煩躁不安、雙前肢搔動(dòng)口鼻、毛發(fā)豎起等情況；小鼠活力明顯降低，且肺組織切片示氣道周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮細(xì)胞損傷，排列紊亂、脫落，氣道壁明顯增厚受損。通過卵白蛋白致敏和激發(fā)的方法建立小鼠模型成功。
　　2．上述表現(xiàn)及氣道炎癥，對(duì)照組無明顯改變，哮喘組明顯重于對(duì)照組，低劑量組、中劑量組明顯輕于哮

9、喘組，且中劑量組明顯輕于低劑量組，但高劑量組明顯重于其它4組。
　　3．各組小鼠氣道壁厚度相比較，哮喘組明顯高于對(duì)照組（P<0.05），低劑量組、中劑量組明顯低于哮喘組明顯（P<0.05），且中劑量組明顯低于低劑量組（P<0.05），但高劑量組較其他4組明顯增高（P<0.05）。
　　4． HMGB1、IL-17在各組小鼠肺內(nèi)的表達(dá)，哮喘組的明顯高于對(duì)照組（P<0.05），低劑量組、中劑量組明顯低于哮喘組（P<0.05），且