RASSF1A基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞JNK磷酸化的影響.pdf

1、目的：
　　研究RASSF1A基因?qū)θ宋赴㎝GC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞的JNK磷酸化水平的影響，初步探討RASSF1A對(duì)JNK信號(hào)通路的調(diào)控在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)2種不同分化程度的人胃癌細(xì)胞（MGC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞），采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染RASSF1A基因后，利用Western Blotting分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因在人胃癌細(xì)胞中的表達(dá)，驗(yàn)證穩(wěn)

2、定轉(zhuǎn)染效果；Western Blotting分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因人胃癌細(xì)胞JNK磷酸化水平。
　　2.分別建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A基因高表達(dá)組、未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對(duì)照組人胃癌細(xì)胞裸鼠皮下成瘤模型，4-6w后提取瘤體組織，Western-blotting檢測(cè)JNK磷酸化水平。
　　結(jié)果：
　　1.人胃癌 MGC-803和SGC-7901細(xì)胞通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 RASSF1A基因后，通過(guò)Western Blotti

3、ng檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組RASSF1A基因蛋白呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示RASSF1A基因被成功轉(zhuǎn)染至人胃癌MGC-803和SGC-7901細(xì)胞，穩(wěn)定高表達(dá)RASSF1A基因2.人胃癌 MGC-803細(xì)胞系和SGC-7901細(xì)胞系成功建立；Western Blotting結(jié)果顯示：人胃癌 MGC-803細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前后，轉(zhuǎn)

4、染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及 pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組中P-JNK及JNK表達(dá)呈明顯下調(diào)趨勢(shì)（P<0.05），而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.通過(guò)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，建立穩(wěn)定高表達(dá)、未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組和pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的不同分化程度的胃癌細(xì)胞（MGC-803和S

5、GC-7901）裸鼠皮下成瘤模型，觀察皮下腫瘤生長(zhǎng)，4-6w后提取瘤體組織，Western-blotting檢測(cè)JNK磷酸化水平，Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組（穩(wěn)定高表達(dá)）所形成的裸鼠瘤體組織中 P-JNK及 JNK表達(dá)呈下降趨勢(shì)（P<0.05），而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>