尋常型銀屑病皮損組織中Nestin、NF-κB及STAT3蛋白表達(dá)的檢測.pdf

1、背景：
　　銀屑病是一種慢性的、易復(fù)發(fā)的與基因遺傳、多種環(huán)境刺激誘導(dǎo)的自身免疫性皮膚病，以細(xì)胞的炎癥和增生為特征而表現(xiàn)為丘疹、紅斑、鱗屑的皮膚病。銀屑病的發(fā)病機制雖尚未十分明確，已知銀屑病表皮干細(xì)胞（stem cell）是銀屑病表皮增殖的根源，Nestin是其干細(xì)胞的標(biāo)志之一。此外，NF-κB核轉(zhuǎn)綠因子可被炎癥因子IL-6，細(xì)胞增殖及 ROS等激活，此激活的炎癥因子可激活JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，尤其是STAT3的磷酸化可靶向提高

2、c-myc/cyclin D1的表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞增殖。因此，應(yīng)用藥物或其它措施抑制干細(xì)胞或抑制NF-κB及STAT3的表達(dá)上調(diào)問題已成為治療銀屑病的靶點。我們在此實驗中擬對尋常型銀屑病標(biāo)本和從整形科獲得的正常皮膚標(biāo)本對Nestin、NF-κB及STAT3的免疫反應(yīng)性或表達(dá)進(jìn)行比較。NF-κB(nuclear factor-κB)是一種真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，可被炎癥和增殖激活，可調(diào)控細(xì)胞因子、趨化因子和粘附分子等在皮膚組織中表達(dá)。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄

3、激活因子3（signal transducer and activator of transcription,STAT3）。由于Nestin、NF-κB、STAT3在正常表皮中均表達(dá)于基底層，基底層是角質(zhì)形成細(xì)胞增殖發(fā)生的重要部位，提示它們與細(xì)胞增殖、炎癥密切相關(guān)。本研究采用免疫組化的方法檢測Nestin、NF-κB、STAT3在尋常型銀屑病變標(biāo)本和正常皮膚標(biāo)本中的表達(dá)定位,闡述其在銀屑病變中的作用機制。
　　目的：
　　擬

4、探討和比較尋常型銀屑病與正常皮膚的Nestin、NF-κB和STAT3的表達(dá)定位和表達(dá)水平。
　　臨床資料
　　收集2013年12月至2014年4月我院皮膚科門診部或者住院部尋常性銀屑病變標(biāo)本和整形外科患者正常皮膚標(biāo)本各14例。其中14例尋常型銀屑病變標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診。取到的所有組織標(biāo)本送于鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院分子細(xì)胞生物學(xué)研究中心，本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽了署知情同意書。
　　方法：
　　各組織細(xì)胞

5、標(biāo)本于4％多聚甲醛固定、吹干及透化，應(yīng)用SP試劑盒，檢測Nestin, NF-κB和STAT3在尋常型銀屑病變標(biāo)本和正常皮膚標(biāo)本的表達(dá)定位水平，各組織標(biāo)本固定、脫水、透明。同時用0.3%H2O2處理入水石蠟，以抑制內(nèi)源性過氧化物酶（HRP）的活性，標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋處理后，行蠟塊切片。應(yīng)用Nestin抗體、NF-κB抗體和STAT3抗體，對皮損組及正常對照組進(jìn)行以Nestin抗體、NF-κB抗體、STAT3抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，進(jìn)行DA

6、B顯色并采圖，同時以PBS替代一抗作為實驗的陰性對照。
　　統(tǒng)計學(xué)分析
　　_本研究計量資料以（x±s）表示,兩組間比較采用雙側(cè)t檢驗, P<0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義, P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義，所有統(tǒng)計學(xué)分析均應(yīng)用SPSS(Statistical Product and Service Solutions)17.0軟件進(jìn)行處理。
　　結(jié)果：
　　Nestin的免疫反應(yīng)性定位于表皮基底層中個別干細(xì)胞的

7、胞質(zhì)內(nèi)，NF-κBp65和 STAT3的免疫反應(yīng)性(Immunoreactivity,IR)表達(dá)定位于表皮基底細(xì)胞和棘層細(xì)胞的胞核及胞質(zhì)。尋常型銀屑病皮損中Nestin-IR、NF-κB-IR和STAT3-IR均明顯高于正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。（ Nestin（167.51±0.05 vs114.38±0.03）、NF-κBp65（127.48±0.12 vs101.27±0.04）和STAT3（196.34±0.09 vs12