不同液體容量復(fù)蘇對內(nèi)毒素血癥大鼠肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞水通道蛋白1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　評價不同液體復(fù)蘇對內(nèi)毒素血癥大鼠肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞水通道蛋白1(AQP-1)表達(dá)的影響。
　　方法:
　　健康清潔級雄性SD大鼠40只，體重250～300 g，6～8周齡。采用隨機數(shù)字表法，將其分為4組(n=10):空白對照組（C組）、氯化鈉復(fù)蘇組(NS組)、6％羥乙基淀粉130/0.4復(fù)蘇組（HES組）和高滲氯化鈉羥乙基淀粉40復(fù)蘇組（HSH組）。用10％水合氯醛，按5ml/kg腹腔注射進行麻醉。常規(guī)備皮

2、消毒后做氣管切開，保留自主呼吸，行面罩吸氧，氧濃度為60％，流量為2L/min。分離一側(cè)股動、靜脈，分別留置22G套管針。股動脈用于連接監(jiān)護儀監(jiān)測平均動脈壓和采集血樣，股靜脈用于補液。于股靜脈緩慢注射LPS（Sigma公司，美國）按5mg/kg溶于0.5ml生理鹽水中制備膿毒癥模型。于造模10 min后，經(jīng)股靜脈注入各組所對應(yīng)的液體，以15 ml/kg恒速輸注6h。于造模后即刻、3、6h時采集股動脈血樣，行血氣分析，記錄PaO2和乳酸(

3、Lac)濃度，計算氧合指數(shù)。同時4℃下3000×g離心10min,取上清于無菌試管內(nèi)-80℃保存。余步驟按照ELISA試劑盒(Cloud-clone公司，美國)操作說明，檢測血清TNF-α濃度。造模6h處死大鼠取肺組織，結(jié)扎左主支氣管取出左肺。用濾紙輕輕擦拭肺組織表面液體，用分析天平稱量肺組織濕重，送至80℃烤箱烘烤48h后取出，稱量肺組織干重，計算肺濕干重比(W/D)。取出左肺后迅速用4％多聚甲醛快速內(nèi)、外固定右肺上葉，浸泡24h后制

4、成蠟塊。采用免疫組化SP法，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、脫水后，用3％過氧化氫滅活內(nèi)源性氧化酶，高壓修復(fù)后，余步驟按試劑盒（Santacruz公司，美國）說明書進行檢測AQP-1表達(dá)情況。用已知陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，AQP-1抗體稀釋濃度為1∶500。肺泡周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈棕黃色染色者為陽性表達(dá)。另取一部分右肺上葉石蠟包埋后切片、制片。HE染色后，用光鏡觀察肺組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)并進行評分。肺組織損傷評分內(nèi)容為肺萎陷、肺泡

5、壁透明膜形成、中性粒細(xì)胞浸潤或聚集，肺泡內(nèi)充血或出血，分別依其嚴(yán)重程度分為0-4級。用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用單因素方差分析(ANOVA)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　與C組比較，NS組、HES組和HSH組W/D比值、血清TNF-α、Lac濃度、肺損傷評分升高，AQP-1表達(dá)下調(diào)，PaO2和氧合指數(shù)降低(P＜0.05)。與NS組比較，HES組和H

6、SH組W/D比值、血清TNF-α、Lac濃度、肺損傷評分降低，AQP-1表達(dá)上調(diào)，PaO2和氧合指數(shù)升高（P＜0.05）。與HES組比較，HSH組血Lac濃度降低(P＜0.01)，其余指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　6％羥乙基淀粉130/0.4溶液和高滲氯化鈉羥乙基淀粉40溶液容量復(fù)蘇可有效減輕內(nèi)毒素血癥大鼠急性肺損傷，且高滲氯化鈉羥乙基淀粉40的效果更顯著，其機制與上調(diào)肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的AQP-1