腸道病毒屬3C蛋白通過調(diào)控IRF7拮抗天然免疫的機(jī)制研究.pdf

1、腸道病毒屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬，其中感染人類的腸道病毒包括腸道病毒A、腸道病毒B、腸道病毒C、腸道病毒D、鼻病毒A、鼻病毒B和鼻病毒C七個(gè)種。腸道病毒(EV)是重要的呼吸道感染病原體，在患有上呼吸道感染的成人中檢出率位居第4，WHO最新報(bào)道顯示，70％的EV感染者是10歲以下兒童。人感染腸道病毒的臨床癥狀表現(xiàn)多樣，除了無癥狀感染外，還會引起廣泛的急性疾病，如EV-A71是引起手足口病的主要病原體;柯薩奇病毒能夠引起無菌性腦膜炎、

2、胰腺炎、Ⅰ型糖尿病等;脊髓灰質(zhì)炎病毒會侵襲神經(jīng)系統(tǒng)引起脊髓灰質(zhì)炎;EV-D68會引起中度到重度呼吸道感染，其主要感染人群是嬰幼兒和青少年;鼻病毒(RV)是引起普通感冒的主要病原體，同時(shí)是誘發(fā)哮喘的主要因素。但是，目前對于腸道病毒的治療主要以支持治療為主，并沒有廣譜有效的疫苗和特效藥物。因此，闡明其致病機(jī)制從而尋找有效的抗病毒藥物和治療方法仍是亟待解決的問題。
　　研究表明，天然免疫逃逸在EV感染致病中發(fā)揮重要作用。我們發(fā)現(xiàn)EV-D

3、68感染細(xì)胞后幾乎不誘導(dǎo)細(xì)胞因子及干擾素的產(chǎn)生，提示EV-D68有拮抗天然免疫的能力。2015年，science報(bào)道了一例IRF7突變的個(gè)體在感染流感病毒后，引起了嚴(yán)重的急性呼吸窘迫綜合征，說明IRF7在機(jī)體防御病毒入侵過程中起著非常重要的作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明，EV-A713C切割干擾素調(diào)控因子7（IRF7）拮抗天然免疫，通過序列比對發(fā)現(xiàn)腸道病毒屬3C有相同的蛋白酶活性位點(diǎn)。因此，我們選取其他種的代表株，深入研究了腸道病毒屬

4、3C對IRF7的影響及調(diào)控天然免疫應(yīng)答的機(jī)制，試圖闡明腸道病毒屬拮抗天然免疫的共性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同種腸道病毒的3C都可以通過切割I(lǐng)RF7而拮抗天然免疫。通過檢測3C蛋白酶抑制劑和3C蛋白酶活性位點(diǎn)突變體對于IRF7蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)抑制劑能夠抑制3C蛋白酶對IRF7的切割。同樣的，缺失3C蛋白酶活性的突變體也不能切割I(lǐng)RF7蛋白，表明EV3C對IRF7的切割依賴于3C蛋白酶活性。不同于腸道病毒A在Q189位點(diǎn)切割I(lǐng)RF7，腸道病毒

5、B、C、D和鼻病毒C切割I(lǐng)RF7在Q167和Q189，鼻病毒A和B除了在Q167和Q189，還在W130位點(diǎn)切割I(lǐng)RF7。利用EV-D68為代表研究IRF7影響EV復(fù)制及3C切割I(lǐng)RF7的意義發(fā)現(xiàn)EV-D68感染可以減少細(xì)胞內(nèi)源IRF7表達(dá)。EV-D68感染不同細(xì)胞系后均引起IRF7蛋白表達(dá)量隨著病毒感染劑量的增加而呈現(xiàn)出劑量依賴性降低，而IRF3、TBK1蛋白表達(dá)量沒有顯著變化。而用慢病毒感染細(xì)胞，敲低IRF7表達(dá)后，EV-D68復(fù)制