川芎嗪及辛伐他汀對高糖狀態(tài)下人腹膜間皮細胞t-PA和PAI-1分泌與表達的影響.pdf

1、背景：腹膜透析（Peritoneal dialysis，PD）為腎臟替代治療的一種方式，有較好地保護殘余腎功能、中分子物質(zhì)濾過效果好、可在家自行治療等優(yōu)點，近年來成為部分終末期腎衰竭患者的首選腎臟替代治療方式。但隨著腹膜透析的持續(xù)進行，腹膜纖維化(peritonealfibrosis，PF)逐漸出現(xiàn)并日漸加重，為腹膜透析常見并發(fā)癥，其影響代謝廢物及水分的超濾，致使肌酐、尿素、胍類等毒素的清除效率下降，患者最終選擇退出腹膜透析，改行其他替

2、代治療。在腹膜纖維化發(fā)生時，腹膜中細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)大量沉積，腹膜血管過度增生，腹膜間皮細胞損傷，纖維化逐漸加重。截止目前的研究已表明，高糖、低PH值、高滲透壓的腹膜透析液及其中的葡萄糖降解產(chǎn)物長期作用于腹膜以及反復發(fā)作的腹膜透析相關(guān)腹膜炎均可誘導致纖維化細胞因子如TGF-β、FGF、VEGF等的分泌，細胞外基質(zhì)大量沉積，血管增生，腹膜纖維化出現(xiàn)及加重。既往研究表明，組織型纖溶酶原激活物(t-

3、PA)、纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是人體正常生命活動所必需的細胞因子，調(diào)節(jié)體內(nèi)的纖溶過程，同時其分泌及表達在腹膜纖維化過程中也有重要影響，可干預腹膜纖維化的發(fā)生、發(fā)展。
　　目的：該研究通過觀察川芎嗪和辛伐他汀對高糖誘導后的人腹膜間皮細胞(humanperitoneal mesothelial cells，HPMCs)中t-PA、PAI-1的分泌及表達，進一步探討上述兩種藥物對上述指標變化的影響機制，為腹膜纖維化的預

4、防及治療提供理論依據(jù)。
　　方法：所用人體腹膜來自鼓樓醫(yī)院腹部手術(shù)（非尿毒癥、腹膜炎）患者，經(jīng)胰蛋白酶消化、分離后得到腹膜間皮細胞，再進行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)，第三代細胞用于本實驗，各次實驗均使用3名患者的腹膜間皮細胞實施3次獨立實驗。用培養(yǎng)液同步48h后，將HPMCs分為8組（每組設3個樣木）觀察:空白對照組（N組，完全培養(yǎng)液），高糖誘導組（H組，2.5％葡萄糖），低劑量辛伐他汀組（高糖+2.5μ mol/L辛伐他汀）、中劑量辛伐

5、他汀組(S2組，高糖+5.0μ mol/L辛伐他汀)、高劑量辛伐他汀組（S3組，高糖+10.0μ mol/L辛伐他汀）、低劑量川芎嗪組(T1組，高糖+川芎嗪10mg/L)、中劑量川芎嗪組(T2組，高糖+川芎嗪20mg/L)、高劑量川芎嗪組(T3組，高糖+川芎嗪40mg/L)。MTT法檢測各組HPMCs的活性，RT-PCR法檢測細胞內(nèi)t-PA和PAI-1的表達， ELISA法檢測細胞上清液中 t-PA和PAI-1蛋白質(zhì)水平，細胞部分用BC

6、A蛋白檢測法測定細胞蛋白質(zhì)表達量，以此校正ELISA結(jié)果。
　　結(jié)果：①高糖誘導組和空白組比較，高濃度葡萄糖能明顯降低腹膜間皮細胞活性(P＜0.01)，同時腹膜間皮細胞中t-PA生成減少和PAI-1的表達增強(P＜0.01）;②與高糖誘導組比較，辛伐他汀干預組腹膜間皮細胞的活性明顯升高(P＜0.01），t-PA生成增加、PAI-1生成顯著減少(P＜0.01），t-PA mRNA表達水平顯著增加、PAI-1 mRNA表達水平顯著降低

7、(P＜0.01)，在蛋白及基因水平上，兩者均與辛伐他汀存在量效關(guān)系;③與高糖誘導組比較，川芎嗪干預組腹膜間皮細胞活性明顯升高(P＜0.01），川芎嗪各干預組（T1、T2、T3組）腹膜間皮細胞活性明顯升高(P＜0.01）， T1、T2、T3組中t-PA的表達量增加，PAI-1的表達量均明顯降低(P＜0.01），t-PA mRNA表達均明顯上調(diào)、PAI-1 mRNA表達明顯降低(P＜0.01），在蛋白和基因水平上，兩者也與川芎嗪有量效關(guān)系。