MMPs在兔腹主動脈AS斑塊內血管新生中的作用及通絡干預的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述:
　　論文Ⅰ 基質金屬蛋白酶在兔腹主動脈動脈粥樣硬化斑塊內血管新生及斑塊穩(wěn)定性中的作用
　　動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)中不穩(wěn)定斑塊破裂從而引發(fā)血栓的形成逐漸成為急性心血管事件的首要病因。因此，穩(wěn)定易損斑塊具有極為重要的臨床意義。病理學研究結果表明，不穩(wěn)定、易破裂的動脈粥樣硬化斑塊具有如下特征:持續(xù)性的炎癥反應，基質降解，以及細胞死亡。這些改變最終導致纖維帽變薄，炎癥增

2、多，壞死核心增大。斑塊內新生血管是動脈粥樣硬化斑塊的另一重要特征。
　　越來越多的研究結果表明，在血管新生過程中，基質金屬蛋白酶不僅參與降解細胞外基質，亦可通過多種其他途徑調節(jié)該過程。MMP-1、-2、-3、-9可促進血管新生，部分MMPs也可抑制血管新生。然而，MMPs在AS進展期斑塊內血管新生中的主要作用仍不明確，有待進一步研究。
　　目的:
　　1.建立與人類AS病變特征類似的動物模型，觀察兔動脈粥樣硬化斑塊進展

3、期各MMPs表達的變化趨勢;
　　2.闡明各MMPs在AS進展期對斑塊內血管新生及其易損性的影響及可能的作用機制。
　　方法:
　　1.建立動物模型
　　純種新西蘭雄性大白兔（體重1.7-2.1kg）27只給予球囊拉傷術損傷腹主動脈后，高脂飼料（1％膽固醇）喂養(yǎng)。分別在術后4、6、8、10和12周末隨機選取5只實驗兔給予安樂死。
　　2.血液生化指標的檢測
　　各實驗兔分別于4、6、8、10和12周末

4、處死前留取自凝血，用作生化指標的測定。禁食12h，稱取體重后，經其耳緣靜脈留取自凝血，采用酶法檢測血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）以及總膽固醇(total cholesterol，TC)的濃度。
　　3.AS易損斑塊

5、的影像學特征檢查
　　于4、6、8、10和12周末處死動物前應用血管內超聲(IVUS)測量血管外膜彈力膜面積(the external elastic membrane area，EEMA)、管腔面積(lumen area，LA)、斑塊面積(plaque area，PA)及斑塊負荷(the percentage of plaque burden，PB)等指標。
　　結果:
　　1.實驗動物基本情況
　　所有實驗兔

6、在球囊損傷后均恢復良好，無并發(fā)癥出現:實驗后期個別實驗兔狀態(tài)較差，分別于術后6周及10周各有1只實驗兔死于腹瀉。
　　2.實驗動物體重的變化
　　隨著實驗進展，所有實驗兔體重均逐步增加，各時間點與上一時間點相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05）。
　　3.血液生化指標的檢測
　　隨著實驗進展，實驗兔血脂各項指標均逐漸升高。8周組、10周組及12周組中TC、HDL-C和LDL-C與6周組相比均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05

7、)，TG則在12周組與6周組相比達到統(tǒng)計學差異(P＜0.05）。
　　結論:
　　1.在AS進展期，斑塊內MMP-1、-2、-3及-9含量逐漸升高，MMP-14含量逐漸降低;VEGF-A含量逐漸升高;斑塊內微血管密度逐漸升高;斑塊易損性逐漸增加。
　　2.在AS進展期，斑塊內MMP-1、-2、-3、-9上調和MMP-14下調與斑塊中微血管密度、斑塊易損性及VEGF-A密切相關，說明在AS進展期，MMP-1、-2、-3、

8、-9可能通過上調VEGF-A的表達促進斑塊內血管新生，進而導致斑塊不穩(wěn)定。
　　論文Ⅱ 通心絡對動脈粥樣硬化中斑塊內血管新生及斑塊穩(wěn)定性的影響
　　急性心血管事件正在嚴重威脅人類的健康，其死亡率呈逐年上升趨勢，動脈粥樣硬化是急性心血管事件的病理學基礎，不穩(wěn)定斑塊發(fā)破裂從而引發(fā)血栓形成日漸成為急性心血管事件的首要病因。AS是一個由多種因素共同參與的病理過程，其發(fā)病機制復雜。近年來，因AS的發(fā)病廣泛且終點事件嚴重，本病已受到越來

9、越廣泛的關注，及早防治勢在必行。然而已患病或其他因素引起的AS病人仍普遍存在，且對AS的治療仍然缺乏有效的措施，故針對其發(fā)病機制，應用有效而合理的藥物，防止已形成的斑塊發(fā)展為易損斑塊，是預防由AS斑塊破裂引起的急性心血管事件的根本原則。
　　基于以上研究，本課題提出假說:通心絡可影響AS斑塊內血管新生;通心絡可能通過影響LRP1的表達進而影響MMP-2及-9的表達，抑制斑塊內新生血管的形成，從而增加斑塊穩(wěn)定性。
　　目的:<

10、br>　　1.研究通心絡在兔腹主動脈AS中對斑塊內血管新生及斑塊易損性的影響;
　　2.闡明通心絡促使斑塊穩(wěn)定可能的作用機制。
　　方法:
　　1.建立動物模型
　　3月齡純種健康雄性新西蘭大白兔(體重1.7-2.1kg)120只，適應性喂養(yǎng)2周，給予球囊拉傷術損傷腹主動脈后，高脂飼料（1％膽固醇）喂養(yǎng)12周。所有動物實驗均嚴格遵守山東大學齊魯醫(yī)院倫理委員會對動物實驗的規(guī)定和要求。
　　2.動物分組及藥物干

11、預
　　成功建立動物模型后隨機將動物分為對照組，小、中、大劑量通心絡組，阿托伐他汀組以及聯(lián)合用藥組:
　　A組（對照組）:20只，成功建立動物模型后，給予普通飼料喂養(yǎng)12周;
　　B組（小劑量通心絡組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+小劑量通心絡(0.15g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　C組（中劑量通心絡組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+中劑量通心絡(0.3g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　

12、D組（大劑量通心絡組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量通心絡(0.6g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　E組（阿托伐他汀組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量阿托伐他汀(5mg/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　F組（聯(lián)合用藥組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量通心絡(0.6g/kg/a)+阿托伐他汀(5mg/kg/d)喂養(yǎng)12周。
　　3.血液生化指標的檢測
　　各實驗兔均處死前留

13、取自凝血，用作血液生化指標的檢測。禁食12h左右，稱取體重后，經其耳緣靜脈留取自凝血，采用酶法檢測血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)以及總膽固醇(totalcholesterol，TC)的濃度。
　　結果:
　　

14、1.實驗動物基本情況
　　所有實驗兔在球囊損傷后均恢復良好，無并發(fā)癥出現;進入藥物干預階段的實驗兔中，中、大劑量通心絡組各死亡2只，對照組、小劑量通心絡組、阿托伐他汀組及聯(lián)合用藥組各死亡1只，死亡原因分別為呼吸道感染或腹瀉。24周末時各組實驗動物存活情況如下:A組（對照組）19只，B組（通心絡小劑量組）19只，C組（通心絡中劑量組）18只，D組（通心絡大劑量組）18只，E組（阿托伐他汀組）19只，F組（聯(lián)合用藥組）19只。

15、　　2.實驗動物體重的變化
　　24周末，所有實驗兔體重較實驗開始前均有所增加，但各組之間相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05）。
　　3.血液生化指標的檢測
　　24周末，與A組相比，其余各組血脂TC、TG及LDL-C含量均有所下降，HDL-C含量則均有所升高:
　　與對照組相比，各藥物治療組血清TC含量均顯著降低(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組TC含量降低最為顯著(P＜0.01)，阿托伐他汀組TC含量較通心絡各組明顯降

16、低(P＜0.01），通心絡各組隨劑量增大降TC效果明顯增強(P＜0.01）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清TG含量均有明顯下調(P＜0.01），聯(lián)合用藥組TG含量下調較為顯著(P＜0.01）;大劑量通心絡組與中劑量通心絡及阿托伐他汀組TG含量相比均無顯著性差異(P＞0.05)，與小劑量通心絡組相比則TG含量顯著降低(P＜0.01）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清LDL-C含量均有所下調（P＜0.01），聯(lián)合用藥組

17、及阿托伐他汀組LDL-C含量降低較為顯著(P＜0.01），二組之間相比LDL-C含量無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）;通心絡大劑量組LDL-C水平與通心絡小劑量組相比顯著降低(P＜0.01），與中劑量通心絡組相比無明顯差異(P＞0.05）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清HDL-C含量均有所升高，大劑量通心絡組HDL-C水平明顯高于中、小劑量通心絡組（P＜0.05），與阿托伐他汀組相比無顯著差異(P＞0.05）;聯(lián)合用藥組HDL-