持續(xù)人工光照對雌性大鼠生殖內(nèi)分泌的影響及滋陰補(bǔ)陽中藥干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探索持續(xù)人工光照對雌性大鼠排卵節(jié)律及卵巢內(nèi)分泌的影響，探討滋陰補(bǔ)陽序貫中藥在組織學(xué)和基因?qū)W水平的干預(yù)作用。
　　方法:選用32只3周離乳雌性SD大鼠，持續(xù)人工光照造模大鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、中藥組3組，觀察大鼠早期性成熟情況、連續(xù)進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞檢測，記錄動情周期情況，持續(xù)光照30天后，在動情前期于凌晨2:00、14:00進(jìn)行開場試驗(yàn)記錄行為學(xué)數(shù)據(jù)，同時眼眶取血檢測褪黑素及性激素。光照3個月后，動情前期凌晨2:00再次

2、記錄開場試驗(yàn)，眼眶取血，檢測褪黑素，14:00進(jìn)行斷頭處死取頸動脈血檢測性激素、褪黑素。手術(shù)摘取各組大鼠卵巢，行HE染色、基因表達(dá)譜檢測、根據(jù)基因表達(dá)譜檢測結(jié)果行RT-PCR及免疫組化鑒定相關(guān)因子表達(dá)情況。
　　結(jié)果:光照初期模型大鼠出現(xiàn)性成熟提前、動情期持續(xù)延長、動情間期延長，逐漸出現(xiàn)周期不規(guī)律，晝夜褪黑素水平均降低，以下午14點(diǎn)差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;性激素中T、PRL、LH均升高，其中T、PRL有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。持續(xù)光照3個月給

3、予滋陰補(bǔ)陽序貫中藥后，三組血清褪黑素均降低，但無組間差異，性激素水平較50天時降低，但組間無差異。HE染色顯示:被膜增厚，膜間質(zhì)細(xì)胞增生，卵泡發(fā)育停滯;皮質(zhì)部所有卵泡均為發(fā)育不良卵泡，顆粒細(xì)胞減少被擠壓呈扁平或立方形，層數(shù)減少，未見優(yōu)勢、成熟卵泡。所有黃體呈彌漫性篩網(wǎng)狀、微囊狀結(jié)構(gòu)，重度擴(kuò)張、無排卵、卵泡原位黃素化并形成大量篩網(wǎng)狀、微囊狀黃體結(jié)構(gòu)，黃體內(nèi)顆粒細(xì)胞顯著減少。中藥治療組卵巢HE染色可見膜間質(zhì)細(xì)胞增生程度減輕，卵泡發(fā)育停滯;未

4、見優(yōu)勢卵泡，但發(fā)育不良卵泡比率較模型組下降、卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞層數(shù)較模型組略增加、仍無排卵痕跡、卵泡原位黃素化，形成篩網(wǎng)狀、微囊狀黃體結(jié)構(gòu)較模型組略減少，正常黃體比率增加。基因表達(dá)譜分析顯示:持續(xù)人工光照對大鼠卵巢基因表達(dá)譜有明顯影響，出現(xiàn)大量差異基因，給予調(diào)整生殖節(jié)律的滋陰補(bǔ)陽中藥后，1067個差異基因的偏差得到調(diào)整，其中611個基因表達(dá)增加，456個基因表達(dá)下降。差異表達(dá)基因的生物學(xué)過程結(jié)合pathway分析結(jié)果表明:滋陰補(bǔ)陽序貫中藥對

5、LHR、EGFR、MT受體等通路的基因網(wǎng)絡(luò)表達(dá)調(diào)控作用明顯。免疫組化結(jié)果顯示，與中藥干預(yù)后光照大鼠卵巢Cry2蛋白表達(dá)明顯差異增加(P＜0.05);中藥增加MT1蛋白表達(dá)(P＜0.05); LHR蛋白表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)，中藥還可明顯增加EFGR蛋白表達(dá)(P＜0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示:中藥干預(yù)后明顯上調(diào)了模型大鼠卵巢Cry2mRNA，MT1mRNA、CYP17A1 mRNA、EGFmRNA、EGFRmRNA基因表達(dá)（P

6、＜0.05）。
　　結(jié)論:1、持續(xù)人工光照對卵巢節(jié)律造成明確的影響，并隨光照時間的延長損傷逐漸加重，可以由初期的性腺功能亢奮轉(zhuǎn)為低落，從陰道脫落細(xì)胞涂片到組織學(xué)、血清褪黑素、卵巢基因表達(dá)譜、蛋白質(zhì)表達(dá)等均有所反應(yīng)。2、持續(xù)人工光照隨著時間的延長，中醫(yī)病機(jī)可由“陰虛陽亢”轉(zhuǎn)為“陰陽兩虛”。3、滋陰補(bǔ)陽序貫中藥符合該病病機(jī)特點(diǎn)，通過滋腎填精、溫補(bǔ)腎陽序貫給藥，提高優(yōu)勢卵泡和成熟黃體比例，改善卵巢功能。4、滋陰補(bǔ)陽中藥不直接提高血清褪黑