生命不同階段炎癥暴露對(duì)雄性小鼠生殖內(nèi)分泌的持續(xù)損害.pdf

1、目的：探討生命不同階段炎癥暴露對(duì)雄性小鼠生殖內(nèi)分泌的持續(xù)損害作用，主要包括出生前LPS暴露對(duì)雄性小鼠睪丸發(fā)育、睪酮合成和精子發(fā)生過程的長期損害效應(yīng)，以及成年期LPS急性暴露對(duì)雄性小鼠睪酮合成和睪丸組織形態(tài)的損害效應(yīng)。
　　方法：本研究由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組成。實(shí)驗(yàn)1，為探討出生前LPS暴露對(duì)雄性小鼠生殖內(nèi)分泌的長期損害作用，孕鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組和LPS組。LPS組孕鼠自妊娠第13天（GD13）至GD17每日經(jīng)腹腔注射給予LPS(50μg/k

2、g)，而對(duì)照組被給予等容積生理鹽水（NS）處理。GD18時(shí)，每組12只孕鼠被處死并取出胎鼠，辨別性別后稱重；雄性胎鼠取血后收集血清，采用放射免疫法（RIA）檢測血清睪酮（T）水平；取胎鼠睪丸置于MDF液中固定，進(jìn)行睪丸病理組織學(xué)檢查；采用免疫組織化學(xué)法（IHC）檢測睪丸3β-羥基類固醇脫氫酶（3β-HSD）的表達(dá)。其余孕鼠自然分娩，出生后第21天（PND21）時(shí)將仔鼠斷乳并保持每籠留有5只小鼠，PND26時(shí)分別測量雄性和雌性仔鼠的肛門生

3、殖器距離（AGD）；PND35和63時(shí)，每組分別隨機(jī)選擇6只雄鼠，取血后頸椎脫臼處死，取睪丸、前列腺和精囊等組織，并稱重；收集雄性仔鼠血清，用RIA法檢測雄鼠血清T含量，用ELISA法檢測血清黃體生成素（LH）含量；將左側(cè)睪丸置于MDF液中固定，進(jìn)行睪丸HE染色，用免疫組織化學(xué)法分析睪丸組織3β-HSD表達(dá)；取PND63仔鼠附睪尾部進(jìn)行精子計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)2，為探討成年期LPS急性暴露對(duì)雄性小鼠生殖內(nèi)分泌的損害效應(yīng)，30只健康成年雄性小鼠被隨

4、機(jī)分入對(duì)照組和LPS組。LPS處理組小鼠經(jīng)腹腔注射給予LPS（1mg/kg），對(duì)照組給予等容積NS。LPS處理后不同時(shí)點(diǎn)（3、6、12和24 h）將小鼠分批剖殺，雙側(cè)睪丸稱重并計(jì)算其臟器系數(shù)；睪丸組織HE染色后觀察病理組織學(xué)改變；采用RIA法檢測小鼠血清睪酮含量；用免疫組化法標(biāo)記3β-HSD，以觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的變化；用定量RT-PCR技術(shù)檢測小鼠睪丸睪酮合成酶mRNA表達(dá)水平；用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測睪丸睪酮合成酶相關(guān)蛋白質(zhì)水平。<

5、br>　　結(jié)果：孕晚期小鼠暴露LPS(50μg/kg)后，GD18雄性胎鼠體重明顯降低，胎鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)異常聚集；PND26雄性仔鼠AGD明顯減小；PND35雄性仔鼠睪丸、前列腺和精囊重量明顯下降，血清睪酮水平顯著降低；睪丸I-VI期生精小管的百分比明顯減少，而IX-XII期生精小管百分比卻明顯上升，且在部分小鼠睪丸生精小管內(nèi)觀察到生精細(xì)胞大量脫落現(xiàn)象；PND63雄性仔鼠血清 T含量明顯降低，附睪尾精子數(shù)量顯著減少。成年期雄鼠急性暴

6、露 LPS（1mg/kg）后，12和24h小鼠睪丸重量、睪丸系數(shù)均明顯增加，睪丸組織生精上皮結(jié)構(gòu)被破壞，管內(nèi)生精細(xì)胞數(shù)量減少；LPS處理后3、6和12h小鼠血清睪酮水平明顯下降，但小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量無明顯變化；進(jìn)一步研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPS處理明顯下調(diào)小鼠睪丸T合成酶（StAR、17β-HSD、CYP17A1和CYP11A1等）mRNA表達(dá)，以及睪丸StAR蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：生命不同階段炎癥暴露可持續(xù)損害雄性小鼠生殖與內(nèi)分泌功能