柴胡藥對配伍對皂苷類成分影響及調(diào)節(jié)RCT的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本論文通過煎煮、代謝、體外細胞模型初步篩選了具有上調(diào)膽固醇逆轉(zhuǎn)運作用的柴胡藥對。通過研究柴胡藥對在煎煮過程中柴胡皂苷變化規(guī)律，從化學(xué)的角度闡釋經(jīng)方中柴胡藥對的配伍科學(xué)性;通過研究代謝過程中柴胡藥對的柴胡皂苷變化規(guī)律和代謝產(chǎn)物的差異，篩查柴胡藥對代謝前后產(chǎn)物對膽固醇逆轉(zhuǎn)運的影響，為柴胡藥對功效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供科學(xué)參考。
　　方法:
　　1.選取柴胡大黃、柴胡白芍、柴胡桂枝、柴胡黃芩、柴胡牡蠣五組不同柴胡藥對

2、的不同配伍比例作為研究對象，建立相應(yīng)的特征圖譜，進行提取工藝的穩(wěn)定性考察試驗，確定提取工藝。對柴胡單煎、柴胡大黃、柴胡白芍、柴胡桂枝、柴胡黃芩、柴胡牡蠣不同比例配伍的水煎液進行柴胡皂苷a、d、b1、b2含量測定，比較單煎液與合煎液中四種皂苷的含量差異。
　　2.選取配伍煎煮含量差異最顯著的藥對配伍，通過體外培養(yǎng)腸道菌，采用HPLC-DAD定量分析柴胡皂苷類成分在代謝過程中的不同成分的變化，并采用LC-MS定性分析代謝物的化學(xué)成分。

3、
　　3.采用HepG2攝取DiI-HDL細胞模型觀察柴胡及其藥對的代謝前后產(chǎn)物對HepG2細胞攝取HDL的影響。
　　結(jié)果:
　　1.煎煮過程中的化學(xué)成分變化:與柴胡單煎組相比，柴胡大黃藥對1∶1和2∶1配伍組柴胡皂苷a含量下降而柴胡皂苷d、b1、b2含量有所升高;柴胡白芍藥對1∶1和8∶3配伍組僅柴胡皂苷a的含量升高，其余的柴胡皂苷含量下降;柴胡桂枝1∶1配伍組中柴胡皂苷a及b2含量低于柴胡單煎，柴胡皂苷d和b1含

4、量高于柴胡單煎，8∶3配伍組各種柴胡皂苷含量提高;柴胡黃芩1∶1和8∶3配伍組各皂苷含量均提高;柴胡牡蠣1∶1配伍組僅柴胡皂苷a、d含量升高，8∶3配伍組各種柴胡皂苷含量均提高。
　　2.代謝過程中的化學(xué)成分變化:柴胡皂苷a變化不明顯;柴胡皂苷d呈先減少后增加再減少再增加趨勢;柴胡皂苷b1呈增加趨勢后出現(xiàn)減少趨勢;柴胡皂苷b2呈下降趨勢并在12小時后降至0;柴胡中的黃酮類成分對柴胡皂苷的代謝影響不大。柴胡黃芩藥對組的柴胡皂苷a有顯

5、著增加的趨勢，柴胡皂苷d、b2呈先增加后減少再增加趨勢，柴胡皂苷b1變化不大。柴胡牡蠣藥對組的柴胡皂苷a變化不大，柴胡皂苷d呈先減少后增加趨勢，柴胡皂苷b1雖然也呈先減少后增加趨勢但浮動不大，柴胡皂苷b2呈下降趨勢但并未降至0。
　　3.LC-MS定性分析柴胡皂苷，檢出7個原型:分別為柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、4"-O-乙酰柴胡皂苷d、柴胡皂苷f、柴胡皂苷i以及t=38.6的C48H78O17;5個代謝產(chǎn)

6、物，分別是前柴胡昔元F、D、A、G以及t=19.9的C36H58O8。代謝產(chǎn)物僅在柴胡24h組和柴胡牡蠣組24h中檢出。
　　4.柴胡單煎、柴胡牡蠣藥對在代謝前后都對肝細胞攝取HDL的能力有上調(diào)作用，且柴胡牡蠣配伍的影響最顯著。柴胡黃芩配伍在代謝前對肝細胞攝取HDL的能力有上調(diào)作用，而在代謝后則出現(xiàn)抑制作用。
　　結(jié)論:
　　當柴胡與其他藥進行配伍，有利于柴胡皂苷的煎出，而且出自《傷寒論》及《金匱要略》的配伍比例往往比