內(nèi)源性內(nèi)皮素-1調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)心房鈉尿肽分泌的作用機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 ERK信號(hào)通路對(duì)缺氧誘導(dǎo)心房ET-1分泌的影響
　　目的:缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)的信號(hào)通路對(duì)缺氧誘導(dǎo)心房內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)生成及其分泌的作用尚不清楚。因此，本研究利用離體家兔心

2、房灌流模型探討ERK信號(hào)通路及HIF-1α對(duì)急性缺氧誘導(dǎo)心房ET-1分泌的作用及其機(jī)制。
　　方法:本研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒捎昧思彝秒x體搏動(dòng)的心房灌流模型，ET-1含量選用放射免疫法進(jìn)行測定，心房肌組織HIF-1α和內(nèi)皮素受體蛋白采用Western blot技術(shù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:急性缺氧顯著提高心房HIF-1α含量和ERK的磷酸化(phosphorylated ERK，pERK)水平。HIF-1α的兩種阻斷劑魚藤酮（0.5μm

3、ol/L）及CAY10585(10.0μmol/L)和ERK信號(hào)通路的拮抗劑PD98059（30.0μmol/L）均可完全阻斷缺氧增加HIF-1α含量的效應(yīng)。而且急性缺氧明顯促進(jìn)心房ET-1的分泌，并上調(diào)內(nèi)皮素的A型受體(ET receptor type A，ETRA)和B型受體(ET receptor type B，ETRB)的表達(dá)。ERK的拮抗劑PD98059可顯著抑制缺氧促進(jìn)ET-1分泌的作用，HIF-1α的阻斷劑魚藤酮可模仿PD

4、98059調(diào)控缺氧誘導(dǎo)心房ET-1分泌的作用。
　　結(jié)論:本研究結(jié)果表明，ERK信號(hào)通路可通過HIF-1α參與調(diào)控缺氧誘導(dǎo)心房ET-1的分泌。
　　第二部分 內(nèi)源性ET-1通過ETR-ERK-GATA-4通路調(diào)控缺氧誘導(dǎo)ANP的分泌
　　目的:對(duì)心臟功能具有重要調(diào)節(jié)作用的內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)可強(qiáng)烈促進(jìn)心房鈉尿肽(atrial natriureitic peptide，ANP)的分泌，但其對(duì)缺

5、氧誘導(dǎo)心房ANP分泌的作用機(jī)制尚不甚清楚。因此，本研究觀察和探討內(nèi)源性ET-1受體及其下游促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)信號(hào)通路對(duì)缺氧誘導(dǎo)ANP分泌的作用。
　　方法:本研究采用家兔離體搏動(dòng)的心房灌流模型，選用放射免疫分析技術(shù)檢測ET-1及ANP含量，利用蛋白

6、印跡法分析ET-1 A、B受體(ET receptor type A，ETRA、ET receptor type B，ETRB)、ERK磷酸化(phosphorylated ERK, pERK)和GATA結(jié)合蛋白-4（GATA binding protein-4，GATA-4）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:急性缺氧明顯促進(jìn)心房ET-1分泌的同時(shí)顯著上調(diào)其ETRA和ETRB的表達(dá)，并伴隨ANP分泌的顯著增多。ETRA、ETRB的阻斷劑B1

7、Q23和BQ788不僅明顯抑制缺氧誘導(dǎo)ANP的分泌，而且阻斷pERK的表達(dá)。ERK的抑制劑PD98059可模仿BQ123和BQ788對(duì)缺氧誘導(dǎo)ANP分泌的作用。另外，BQ123和BQ788還可明顯抑制缺氧增加GATA-4含量的效應(yīng)。
　　結(jié)論:內(nèi)源性ET-1可通過ETR-ERK-GATA-4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控缺氧誘導(dǎo)心房ANP的分泌。
　　第三部分 ET-1-ETR-L-PGDS通路參與調(diào)控缺氧誘導(dǎo)心房ANP分泌
　　目

8、的:Lipocalin型前列腺素D合成酶(L-PGDS)對(duì)缺血/缺氧心臟具有重要的保護(hù)作用。然而，L-PGDS對(duì)缺氧誘導(dǎo)心房鈉尿肽(ANP)分泌的作用不清楚。因此，本研究觀察和探討L-PGDS對(duì)缺氧誘導(dǎo)離體搏動(dòng)家兔心房ANP分泌的作用及其機(jī)制。
　　方法:本研究采用家兔離體搏動(dòng)的心房灌流模型，選用放射免疫分析技術(shù)檢測內(nèi)皮素-1(ET-1)及ANP的含量，利用蛋白印跡法分析L-PGDS的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:急性缺氧不僅明顯促

9、進(jìn)離體搏動(dòng)的家兔心房ET-1的分泌，而且顯著上調(diào)L-PGDS的表達(dá)，并伴隨心房ANP分泌的顯著增加。內(nèi)皮素受體阻斷劑可明顯減緩缺氧誘導(dǎo)L-PGDS的表達(dá)，L-PGDS抑制劑可模仿內(nèi)皮素受體阻斷劑的效應(yīng)。另外，內(nèi)皮素受體阻斷劑和L-PGDS的抑制劑均可顯著減緩缺氧促進(jìn)心房ANP分泌的效應(yīng)。內(nèi)皮素受體阻斷劑和L-PGDS抑制劑的聯(lián)合用藥效果與各自效應(yīng)類似，并未呈現(xiàn)疊加影響。而L-PGDS抑制劑在常氧或缺氧條件下均未能改變ET-1對(duì)ANP分泌