幽門螺桿菌口腔唾液測試板的臨床實用價值研究.pdf

1、背景：
　　1983年，澳大利亞學(xué)者沃倫(Warren)和馬歇爾(Marshall)首次在胃炎患者的胃黏膜中發(fā)現(xiàn)了幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)，引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。迄今為止，關(guān)于Hp的研究取得了長足進(jìn)展。1994年，世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)將H.pylori定為Ⅰ類（明確的）致癌物質(zhì)。目前其已經(jīng)被確認(rèn)是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍、胃黏膜相關(guān)性淋巴樣組

2、織(MALT)淋巴瘤、成人和兒童不明原因的缺鐵性貧血以及特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)等疾病的重要致病因素。
　　此外，醫(yī)學(xué)界曾認(rèn)為胃是幽門螺桿菌（H.pylori）的唯一生存環(huán)境，但自從1989年Krajden等學(xué)者首次從胃炎患者的牙菌斑中、1993年Ferguson等首次從唾液中分離并成功培養(yǎng)出H.pylori以來，口腔作為Hp定植和生長的另一重要環(huán)境逐漸得到學(xué)者們的廣泛認(rèn)可。隨后，口腔幽門螺桿菌的研究成為H.pylori研

3、究的又一熱點。有學(xué)者認(rèn)為，幽門螺桿菌可能是一類條件致病菌，它除了可以引起胃部病變，還可能誘發(fā)疾病。消化道有病變的患者，其口腔中的幽門螺桿菌與胃黏膜內(nèi)的幽門螺桿菌在形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特征上相似，具有同源性。而口腔中廣泛存在于唾液、牙菌斑等部位的幽門螺桿菌不僅可導(dǎo)致口腔疾病，還可能隨唾液吞咽到達(dá)胃內(nèi)并定植，從而引起胃內(nèi)病變，造成胃內(nèi)幽門螺桿菌再次感染和復(fù)發(fā)。
　　幽門螺桿菌（H.pylori）感染現(xiàn)已成為人類最常見的慢性細(xì)菌感染之一，其感

4、染率受到社會經(jīng)濟水平、教育水平、水源、地域、職業(yè)、年齡、種族及飲食衛(wèi)生習(xí)慣等等因素的影響。吸煙、飲酒與H.pylori感染的關(guān)系暫未完全明確，需進(jìn)一步研究。流行病學(xué)提示，發(fā)達(dá)國家幽門螺桿菌的感染率約為10％-50％，而發(fā)展中國家H.pylori的感染率可達(dá)到40％-80％，部分欠發(fā)達(dá)國家可高達(dá)90％以上。我國也是幽門螺桿菌高感染率的國家之一，H.pylori的評價感染率約為56.22％，其中，廣東地區(qū)H.pylori感染率最低，約為42

5、.01％，而西藏地區(qū)的感染率最高，為84.62％。但并非所有感染幽門螺桿菌的個體均出現(xiàn)明顯的消化道癥狀，通常僅有10-15％的感染者可能出現(xiàn)典型的臨床表現(xiàn)。目前臨床上診斷H.pylori感染的方法很多，主要分為侵入性和非侵入性檢查兩大類。侵入性檢查需要借助胃鏡檢查方能完成，是一類損傷性檢查方法，包括快速尿激酶試驗(RUT)、組織學(xué)檢查、細(xì)菌培養(yǎng)等;非侵入性檢查則無需胃鏡輔助，具有無損傷、受試者耐受性好等特點，主要包括同位素標(biāo)記的13C或

6、14C尿素酶呼氣試驗(13C或14C-UBT)、糞便抗原、血清學(xué)方法（H.pylori抗體等）和分子生物學(xué)（如PCR、基因測序等）檢測等等。因為侵入性檢查往往存在受試者耐受性較差、測試儀器價格昂貴、檢測時間長以及對相關(guān)技術(shù)要求較高等限制，同時還可能存在交叉感染等問題，現(xiàn)今非侵入性檢查已逐漸成為學(xué)者們研究幽門螺桿菌感染檢測的熱點。唾液幽門螺桿菌測試板(Hp Saliva Testcassette，HPS)是近年來新出現(xiàn)的一種檢測H.pyl

7、ori感染的非侵入性方法，其不同于既往簡單的抗原和抗體檢測，而是應(yīng)用膠體金層析式雙抗體夾心法原理，能針對性的檢測人體唾液中由H.pylori產(chǎn)生的尿素酶，與口腔內(nèi)其他能產(chǎn)生尿素酶的菌類無交叉反應(yīng)，特異性強，因而能達(dá)到檢測幽門螺桿菌的目的。
　　本文主要研究三部分內(nèi)容，來探討HPS檢測幽門螺桿菌（H.pylori）感染的臨床價值:第一，HPS法檢測唾液幽門螺桿菌感染的情況，并將HPS的檢測結(jié)果分別與RUT和HE聯(lián)合檢測、快速尿素酶試

8、驗(RUT)、胃黏膜組織切片染色(HE染色)的結(jié)果進(jìn)行比較。第二，對胃黏膜組織病理提示為萎縮、糜爛、胃息肉、不典型增生和腸上皮化生五種類型的研究對象，分別對其HPS和HE檢測幽門螺桿菌的結(jié)果進(jìn)行比較分析。第三，同時行結(jié)腸鏡檢查的受試者中，對結(jié)腸鏡發(fā)現(xiàn)息肉，以及內(nèi)鏡下息肉切除后病理提示為腺瘤性息肉的病例，分別對其HPS和RUT檢測幽門螺桿菌的結(jié)果進(jìn)行比較分析。
　　目的：
　　幽門螺桿菌（H.pylori）感染能引起胃內(nèi)及胃外

9、的一系列病變，是WHO確定的Ⅰ類致癌物質(zhì)，是胃腺癌的首要病因。目前幽門螺桿菌已經(jīng)被確認(rèn)是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍、胃黏膜相關(guān)性淋巴樣組織(MALT)淋巴瘤、成人和兒童不明原因的缺鐵性貧血以及特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)等疾病的重要致病因素。唾液幽門螺桿菌測試板(HPS)是近年來新出現(xiàn)的檢測H.pylori感染的非侵入性方法，應(yīng)用膠體金層析式雙抗體夾心法原理，能針對性的檢測人體唾液中由H.pylori產(chǎn)生的尿素酶，特異性強。本文通過對

10、唾液HPS檢測法與傳統(tǒng)的RUT、病理HE染色法進(jìn)行比較，同時比較HPS和HE對常見胃部病理類型的H.pylori的檢出率，以及HPS和病理HE染色對結(jié)腸息肉特別是腺瘤性息肉對應(yīng)H.pylori陽性率有無差異，探討HPS檢測幽門螺桿菌感染及其對常見病變的臨床應(yīng)用價值。
　　方法：
　　1、一般資料選擇2013年10月至2014年3月期間無明顯消化道癥狀來我院行胃鏡檢查的體檢者，均獲得知情同意。共納入228例符合條件者，其中男性

11、154例，女性74例;年齡24-68歲，平均47.5歲。同時行結(jié)腸鏡檢查的146例，行息肉切除的51例。納入研究者均應(yīng)排除以下情況:(1)心肺肝腎功能嚴(yán)重?fù)p害;(2)惡性腫瘤;(3)最近2個月內(nèi)接受過質(zhì)子泵抑制劑、抗生素、H2受體拮抗劑和鉍劑的治療。
　　2、HPS檢測方法胃鏡檢查前（空腹8h以上），使用HPS抗原測試板，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作:
　　1)囑患者在胃鏡檢查前留取唾液1-2ml;
　　2)將唾液吐入塑料杯

12、中;
　　3)將測試板置于平坦臺面上，用吸管吸取4滴唾液，滴入取樣杯中;
　　4)滴加2滴緩沖液于取樣杯中;
　　5)更換吸管，充分混勻液體后，吸取3-4滴混合液滴入加樣窗口，5-15分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
　　結(jié)果判定:指示窗口顯示檢測帶（T區(qū)）和對照帶（C區(qū)）均出現(xiàn)色帶，說明H.pylori陽性;只顯示C區(qū)色帶，說明H.pylori陰性;均未出現(xiàn)色帶為無效。
　　3、胃黏膜組織快速尿激酶實驗(rapid ur

13、ease test，RUT)檢測方法使用我院實驗室生產(chǎn)的胃幽門螺桿菌快速尿素酶試劑進(jìn)行檢測，胃鏡下取得的胃竇部和（或）胃體部的黏膜組織標(biāo)本，按照常規(guī)進(jìn)行操作及結(jié)果判定。觀察5分鐘顏色變粉紅即為H.pylori陽性。
　　結(jié)果：
　　1、HPS、RUT、HE檢測H.pylori感染的比較:
　　1) HPS與聯(lián)合檢測（RUT或HE）相比較，陽性檢出率分別為47.8％、41.67％，陽性符合率（靈敏度）為84.2％，陰性符

14、合率（特異度）為78.2％，準(zhǔn)確率為75.4％，陽性預(yù)測值為73.4％，陰性預(yù)測值為87.4％;
　　2) HPS與HE檢測相比較，陽性檢出率分別為47.8％、40％，陽性符合率（靈敏度）為85.7％，陰性符合率（特異度）為68.7％，準(zhǔn)確率為75.4％，陽性預(yù)測值為64.5％，陰性預(yù)測值為87.8％;
　　3) HPS與RUT檢測比較，陽性符合率（靈敏度）為88.7％，陰性符合率（特異度）為67.5％，準(zhǔn)確率為73.2％，

15、陽性預(yù)測值為50.5％，陰性預(yù)測值為94.1％。
　　2、常見病理類型對應(yīng)HPS與HE檢測:行胃黏膜活檢的175例中，病理分別診斷為萎縮、糜爛、胃息肉、腸上皮化生及不典型增生的病例，H.pylori感染均有著較高的檢出率。對HPS與HE的結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗，萎縮、腸上皮化生及不典型增生三種類型中，HPS與HE檢測方法的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、HPS具有操作簡單、快速、無痛苦等優(yōu)點，被檢者耐

16、受性好。
　　2、HPS、RUT、HE染色檢測幽門螺桿菌感染的比較:HPS陽性檢出率為47.8％，與文獻(xiàn)報道H.pylori的平均感染率較為一致。HPS與RUT、HE染色檢驗H.pylori感染陽性率相比較，靈敏度、特意度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值均具有較理想的數(shù)值。提示HPS是臨床篩查H.pylori感染的一種很有價值的非侵入性方法，值得臨床進(jìn)一步驗證。
　　3、病理類型對應(yīng)HPS與病理HE檢測:HPS與HE染色在五

17、種常見的病理類型均具有較高的幽門螺桿菌陽性檢出率，印證了H.pylori感染與上述病變有相關(guān)性。胃黏膜萎縮、腸上皮化生和不典型增生是由非萎縮性胃炎向胃腺癌演變過程中重要的病變階段，是胃癌的癌前病變。HPS與HE檢測H.pylori感染在上述三種病理類型中均具有較高的檢出率，且HPS的陽性率相比HE染色有顯著性差異，提示HPS在篩查萎縮、腸上皮化生和不典型增生等癌前病變中可能具有一定的意義，可用于可能出現(xiàn)上述病變的特定人群的篩查。

18、　　4、結(jié)腸息肉與腺瘤性息肉對應(yīng)HPS與HE檢測:HPS與HE染色檢測幽門螺桿菌感染均提示，在檢出結(jié)腸息肉以及腺瘤性息肉的病例中，H.pylori均具有較高的檢出率，提示HPS在篩查腸息肉以及腺瘤性息肉中可能具有一定的意義。腺瘤性息肉是結(jié)直腸癌最重要的癌前病變，近年來的研究提示，幽門螺桿菌及其毒力因子CagA可能是結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展的危險因素之一。因此我們推斷，HPS對萎縮、腸上皮化生、典型增生以及結(jié)結(jié)直腸息肉等病變的篩查可能具有一定