睪丸組織高表達(dá)蛋白TRIM69在精子發(fā)生中的功能研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是維持機(jī)體組織平衡的重要生物學(xué)過(guò)程，泛素化介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解與修飾在細(xì)胞凋亡調(diào)控中發(fā)揮著十分關(guān)鍵的作用。TRIM家族(tripartite motif,三結(jié)構(gòu)域蛋白)是含有RING-finger結(jié)構(gòu)域的蛋白家族，是E3泛素連接酶的最大亞家族之一，該家族蛋白參與非常廣泛的細(xì)胞生理病理進(jìn)程，調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過(guò)程。TRIM69是我室從人睪丸cDNA文庫(kù)中分離并鑒定的TRIM家族的新成員，本實(shí)驗(yàn)室前期的工作發(fā)現(xiàn)，TRIM69在小鼠睪丸組織中

2、特異性高表達(dá)，可能與精子發(fā)生有一定關(guān)系。迄今為止，關(guān)于TRIM69在生殖中的功能報(bào)道很少。
　　為了研究TRIM69在哺乳動(dòng)物精子發(fā)生過(guò)程中的功能，我們利用Lox-Cre同源重組系統(tǒng)構(gòu)建了Trim69 RING-finger結(jié)構(gòu)域特異性敲除的小鼠。經(jīng)過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常小鼠相比，Trim69 RING-finger結(jié)構(gòu)域敲除后小鼠的精子發(fā)生和生殖細(xì)胞凋亡情況未受到明顯影響，在給予外界刺激如低壓低氧時(shí)，依然未表現(xiàn)出明顯的生理

3、差異。之后，我們又利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)構(gòu)建了Trim69全基因敲除鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)將Trim69完全敲除后小鼠確實(shí)存在不育現(xiàn)象，但仍需進(jìn)一步確定其不育是否是由于Trim69的缺失而導(dǎo)致。此外，為了研究TRIM69在生精細(xì)胞凋亡調(diào)控中的作用，我們?cè)隗w外構(gòu)建并篩選了過(guò)表達(dá)人源TRIM69的穩(wěn)定細(xì)胞系，經(jīng)過(guò)DNA損傷誘導(dǎo)處理（紫外線照射和藥物刺激）后發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)TRIM69的細(xì)胞表現(xiàn)出較明顯的抗凋亡特征。而內(nèi)源性TRIM6