固本培元、養(yǎng)心安神法對慢性睡眠剝奪大鼠模型作用機制的理論和實驗研究.pdf

1、目的：以《內經》失眠理論為基礎，梳理歷代醫(yī)家睡眠理論及實踐經驗認識，提出臟腑本元虧虛、心神失養(yǎng)是慢性失眠發(fā)病基礎，固本培元，養(yǎng)心安神是失眠治療基本原則，并且在系統(tǒng)梳理歷代醫(yī)家用藥經驗基礎上，結合導師臨床實踐基礎創(chuàng)立了固本安神方。通過觀察固本安神方水煎劑、酒劑對閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間和閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠入睡率的影響、慢性睡眠剝奪大鼠模型呼吸頻率、心率及力竭游泳實驗等指標變化，分析固本安神方促眠實驗、大鼠學習記憶能力和神經

2、遞質及其受體表達等指標監(jiān)測分析，較系統(tǒng)地對固本安神方的作用機制進行評價。
　　方法：先取健康昆明種小鼠84只,以12只每組的數(shù)量標準，隨機分為空白對照組、艾司唑侖組、固本安神方小劑量組、固本安神方大劑量組、金眠酒低劑量組、金眠酒中劑量組和金眠酒高劑量組。除空白對照組以外各組按人與小鼠之間等效劑量換算分別為0.13mg.kg-1.d-1、15g.kg-1.d-1、30g.kg-1.d-1、0.30g/kg-1.d-1、0.60g/k

3、g-1.d-1、1.20g/kg-1.d-1，給藥容積則為0.2ml.10g-1，觀察固本安神方的促眠作用。然后將健康Wistar大鼠隨機分成5組，每組8只：空白對照組；模型組；固本安神方小劑量組；固本安神方大劑量組，艾司唑侖組。固本安神方大、小劑量組實驗動物在睡眠剝奪造模滿4w后開始灌服給藥7天，給藥容積為2ml.100g-1。艾司唑侖組實驗動物中，將艾司唑侖研磨成粉狀用純凈水混合，按0.05 mg〃kg-1〃d-1用藥標準灌胃。所有

4、動物給藥時間均為每晚18：00。持續(xù)一周治療結束后取材所有動物。具體指標檢測結果如下：
　　1對實驗動物睡眠情況、活動量、雙目及口唇、爪甲皮毛等一般情況和呼吸頻率、體重、攝食量、力竭游泳實驗結果等情況進行前后對比監(jiān)測分析；
　　2利用Morris水迷宮實驗觀察分析大鼠學習記憶能力的變化；
　　3采用液質聯(lián)用法檢測各組實驗大鼠下丘腦部位谷氨酸（Glu）及γ-氨基丁酸（GABA）含量、熒光定量PCR檢測大鼠下丘腦γ-氨基丁

5、酸受體GABAA-RmRNA的影響
　　4采用高效液相色譜法檢測下丘腦5-羥色胺、ELISA法檢測5-羥吲哚乙酸的影響
　　結果：
　　1與空白對照組比較，艾司唑侖組、固本安神方大、小劑量組及金眠酒高中低劑量組均能顯著延長閾上劑量標準戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間，效果明顯（P<0.01），增加閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率效果顯著（P<0.01），實驗結果表明，固本安神方大劑量組對小鼠的催眠作用比低劑量組更明顯，但無統(tǒng)計

6、學意義（P>0.05），酒劑作用比水煎劑效果明顯，但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　2模型組動物時有呵欠不斷，嗜睡，懶動，精神萎靡，雙目、口唇呈蒼白色或淡粉紅色；目光呆滯，皮毛枯槁蓬亂、濕透，呈淡象牙色澤，爪甲粗糙，抓取反抗無力；固本安神方大、小劑量組實驗動物精神稍萎靡，時有呵欠，雙目及口唇呈白色，皮毛略有枯槁蓬亂現(xiàn)象，抓取時反抗較劇。與空白對照組相比，模型組呼吸頻率、心率加快明顯，收縮壓升高顯著，力竭性游泳時間縮短顯著，體重

7、減輕顯著，耳溫升高顯著，攝食量減少顯著(P<0．01)；與模型組比較，固本安神方大、小劑量組呼吸頻率降低顯著，心率減慢顯著，力竭性游泳時間顯著延長，耳溫顯著降低，攝食量顯著增加(P<0．01)，收縮壓降低，體重增加(P<0．05)；與模型組比較，艾司唑侖組呼吸頻率降低顯著，力竭性游泳時間顯著延長(P<0．01)，收縮壓降低，攝食量增加，耳溫降低(P<0．05)，但心率減慢和體重增加指標無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。固本安神方總體效果優(yōu)于

8、艾司唑侖，且呈量效遞增關系。
　　3在定位航行與空間搜索實驗中，與空白對照組相比，模型組潛伏期時間延長顯著(P<0．01)，平臺象限的游泳距離占總距離百分比顯著降低(P<0．01)，跨過原平臺位臵次數(shù)顯著下降(P<0．01)，池壁20％區(qū)域、池壁40％區(qū)域游泳距離百分比升高顯著(P<0．01)；與模型組相比，固本安神方大、小劑量組和艾司唑侖組潛伏期時間縮短顯著(P<0．01)，平臺象限間游泳距離百分比顯著升高(P<0．01)，跨過

9、原平臺位臵次數(shù)顯著增加(P<0．01)，池壁20％區(qū)域、池壁40％區(qū)域游泳距離百分比降低顯著(P<0．01)。中藥固本安神方療效總體優(yōu)于西藥艾司唑侖。
　　4與空白對照組相比，模型組大鼠下丘腦部位Glu、GABA兩類神經遞質含量均明顯增高(P<0．01)，Glu增加相對更為明顯，Glu、GABA比值比例增大；固本安神方大、小劑量組大鼠下丘腦部位氨基酸類神經遞質Glu、GABA含量與模型組比較，顯著減少， Glu減少相對更為明顯，且

10、Glu/GABA比值比例有減小現(xiàn)象，并且呈現(xiàn)出一定量效關系發(fā)生（P<0．05)；與空白對照組比較，模型組大鼠下丘腦組織GABAA-R mRNA表達明顯下調（P＜0.01）；與模型組比較，固本安神方高、低劑量組及艾司唑侖組大鼠下丘腦組織GABAA-R mRNA表達明顯上調(P＜0.01)。
　　5與空白對照組相比，模型組大鼠下丘腦內5-HT和5-HIAA含量降低，較明顯(P<0.01)；固本安神方大、小劑量組下丘腦中5-HT含量均增

11、加,與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)；艾司唑侖組與模型組相比,下丘腦中5-HIAA含量增加,二者相比有顯著性差異(P<0.05)。固本安神方大劑量組和艾司唑侖組下丘腦中5-HIAA含量均有增加,與模型組相比有顯著性差異(P<0.05);固本安神方小劑量組下丘腦中5-HIAA含量與模型組相比有增加，但無顯著性差異(P>0.05)。
　　結論：
　　1、在《內經》理論基礎上，綜合中醫(yī)歷代醫(yī)家相關睡眠理論，提出臟腑本元虧虛

12、、心神失養(yǎng)是導致失眠發(fā)病的根本原因，根據中醫(yī)學的整體觀念提出了“固本培元，養(yǎng)心安神”的治療原則，并且在系統(tǒng)梳理歷代醫(yī)家用藥經驗及導師臨床實踐經驗基礎上創(chuàng)立了固本安神方。
　　2、固本安神方和艾司唑侖相比，臨床療效相當，并呈量效遞增關系，固本安神方對模型大鼠中醫(yī)癥狀的療效改善強于艾司唑侖，且副作用小。
　　3、從固本安神方高、低劑量組和金眠酒中、高劑量組及艾司唑侖組實驗結果來看，在增加閾下劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠只數(shù)實驗結果

13、方面，各組均有顯著效果，且可延長閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間，說明固本安神方與鎮(zhèn)靜催眠藥艾司唑侖有協(xié)同作用，從而證實了固本安神方具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用,且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。酒劑與中藥配伍雖有協(xié)同增效作用，但在此次試驗中金眠酒相較于湯劑效果差異性不明顯（P>0.05），該藥效實驗為進一步深入研究固本安神方對慢性SD大鼠模型的作用機制打下基礎。
　　4、固本安神方可明顯影響實驗動物5-HT以及5-HIAA含量，使其接近正常