局部應用PTH(1-34)對兔即刻種植骨整合的作用.pdf

1、目的：通過拔除兔上下頜切牙建立即刻種植模型，分別植入含負載重組人甲狀旁腺激素（1-34）[Recombinant human parathyroid hormone（1-34）, PTH(1-34)]的仿生磷酸鈣(Calcium phosphates，CaP)涂層鈦螺紋釘，以及單純仿生CaP涂層鈦螺紋釘，觀察并檢測鈦螺紋釘周圍骨組織再生情況，探討PTH(1-34)局部應用對種植體骨整合的作用，為臨床提高種植體骨整合強度和速率提供實驗參考

2、和依據(jù)。
　　方法：
　　1.鈦螺紋釘涂層制備：使用800#砂紙將鈦螺紋釘打磨粗化，高溫高壓消毒后備用。把全部鈦螺紋釘浸泡于5M NaOH溶液中，放置于60℃恒溫箱浸泡24h，純水沖洗，室溫干燥。1％牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)預處理所有容器內(nèi)壁，預防 PTH(1-34)被容器內(nèi)壁附著的酶降解。將實驗組24顆鈦螺紋釘垂直放置到含1.0ml改良模擬體液和100μg/ml PTH(1-34)的

3、容器中，對照組12顆鈦螺紋釘放置到只含1.0ml改良模擬體液的容器中，42℃水浴24h，純水沖洗，室溫干燥。-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　2.分組：健康成年新西蘭大白兔9只，雌雄不限，隨機分為2組，實驗組6只，對照組3只。實驗組即刻植入負載PTH(1-34)的CaP涂層鈦螺紋釘，對照組植入單純CaP涂層的鈦螺紋釘。每只實驗動物植入4顆鈦螺紋釘，共36個樣本。分別于4周、8周、12周處死實驗組實驗動物2只，對照組實驗動物1只。

4、　　3.動物模型制備：局麻下分次磨除兔上下頜4顆切牙牙冠至平齦，每星期磨除一次，共3次，磨除過程中使用0.9%氯化鈉注射液持續(xù)沖洗降溫。經(jīng)分次磨除后，全麻下完整拔除兔上下頜4切牙，無菌生理鹽水沖洗拔牙窩，新鮮拔牙窩下段填塞人凍干骨，隨即將處理過的鈦螺紋釘按上述分組植入拔牙窩內(nèi)，嚴密縫合創(chuàng)口。
　　4.結(jié)果觀察：分別于術(shù)后4、8、12周以深度麻醉法處死實驗動物，分離出兔上下頜骨，并去凈附著的軟組織。大體觀察各標本中鈦螺紋釘有無松動、

5、脫落以及鈦螺紋釘周圍骨組織包裹情況；X線片觀察鈦螺紋釘周圍新生骨量和分布情況；檢測 X線片鈦螺紋釘周圍新生骨的灰度值，行骨密度統(tǒng)計學分析；生物力學指標檢測鈦螺紋釘-骨界面的結(jié)合強度，通過扭矩實驗得出最大扭矩值，行統(tǒng)計學分析；組織學觀察，標本切片后行HE染色，光鏡下觀察鈦螺紋釘周圍細胞反應和新生骨鈣化情況等。
　　結(jié)果：
　　1.大體觀察：實驗組鈦螺紋釘均無松動、脫落現(xiàn)象，新生骨組織緊密包繞在鈦螺紋釘周圍。對照組4周部分鈦螺紋

6、釘松動，但未脫落，可見鈦螺紋釘齦方存在骨缺損區(qū)；隨時間延長，鈦螺紋釘松動現(xiàn)象逐漸消失，骨缺損面積減小。
　　2.X線觀察：X線片可見各標本鈦螺紋釘均在位，且兩組鈦螺紋釘周圍新生骨量均隨時間延長而增加。術(shù)后4周實驗組可見鈦螺紋釘周圍新生骨呈云霧狀，包繞鈦螺紋釘整體；對照組見螺紋釘周圍透射影像，鈦螺紋釘頂端見骨缺損區(qū)。8周時兩組鈦螺紋釘周圍新生骨量和骨密度較4周時均有所升高，實驗組新生骨界限不明顯。12周實驗組見新生骨組織密度較正常更

7、高；對照組骨缺損區(qū)全部消失，但骨密度仍低于正常骨組織。
　　3.骨密度分析:各標本鈦螺紋釘周圍新生骨組織平均灰度值均隨時間延長而升高，且術(shù)后4周、8周、12周實驗組平均灰度值均高于對照組。同一時間點下平均灰度值統(tǒng)計學分析得P值分別為0.032、0.013、0.027， P值均小于0.05，有統(tǒng)計學意義。
　　4.扭矩測試：兩組標本最大扭矩值均隨時間延長而增加，且術(shù)后4周、8周、12周實驗組最大扭矩值均大于對照組的最大扭矩值。

8、同一時間點下對最大扭矩值行統(tǒng)計學分析，得P值分別為0.04、0.018、0.002，P值均小于0.05，有統(tǒng)計學意義。
　　5.組織學觀察：同一時間點下，實驗組新骨生成速度更快，骨成熟度更高。4周實驗組可見大量成骨細胞及骨吸收陷窩，類骨質(zhì)分泌較多，新生血管豐富，編織骨形成；對照組鏡下見大量結(jié)締組織細胞，破骨細胞較多，類骨質(zhì)分泌極少，毛細血管稀疏。8周實驗組類骨質(zhì)礦化成骨基質(zhì)，骨小梁排列密集粗大，見編織骨轉(zhuǎn)變?yōu)榘鍫钚鹿牵粚φ战M成骨細