口腔鱗狀細(xì)胞癌中Dickkopf-3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、目的：口腔癌是頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，位居人類(lèi)全身惡性腫瘤的第六位。目前，我國(guó)口腔癌的發(fā)病率居高不下，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查研究表明其病因與吸煙、飲酒、口腔衛(wèi)生等多種因素相關(guān)，且呈年輕化的趨勢(shì)。盡管隨著多學(xué)科綜合序列治療模式的引入使口腔癌的治療取得了一定程度上的突破，但其五年生存率仍不理想。DKK-3(Dickkopf-3)作為Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路中重要的抑制劑之一，先后在肺癌、食管癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)其 mRNA的低表達(dá)及啟動(dòng)子區(qū)的高

2、甲基化狀態(tài)，提示 DKK-3可作為候選抑癌基因參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。但目前關(guān)于DKK-3基因在口腔頜面部惡性腫瘤中的研究仍鮮有報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)口腔鱗狀細(xì)胞癌組織及相應(yīng)正?？谇火つそM織中DKK-3基因mRNA的表達(dá)水平及其啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，探索DKK-3基因與口腔癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為DKK-3成為新的口腔癌靶基因治療的生物學(xué)指標(biāo)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科2014年09月至2

3、015年12月手術(shù)切除的原發(fā)口腔鱗癌組織為研究對(duì)象，癌旁2cm處的正?？谇火つそM織為對(duì)照。術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)癌組織標(biāo)本為鱗狀細(xì)胞癌，癌旁組織非腫瘤組織。所用標(biāo)本均為術(shù)后立即取材，于-80°冰箱中凍存。應(yīng)用RT-PCR及甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR，MSP)的方法分別檢測(cè)DKK-3基因在口腔鱗癌組織及相應(yīng)正常黏膜組織 mRNA的表達(dá)情況及其啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，分析DKK3與年齡、性別、吸煙、臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等各臨床病理特征的關(guān)系。
　　結(jié)果：1 DKK-3基因 mRNA在口腔鱗癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.41±0.27，在其對(duì)應(yīng)正?？谇火つぶ邢鄬?duì)表達(dá)量為0.50±0.29，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-12.580，P<0.05)。同時(shí)，吸煙組DKK-3基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.22±0.16低于不吸煙組 mRNA相對(duì)表達(dá)量0.63±0.21（t=-8

5、.018，P<0.05）；臨床Ⅰ期、Ⅱ期的 DKK-3基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.46±0.29高于臨床Ⅲ期、Ⅳ期 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.28±0.19（t=2.214，P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 DKK-3基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.24±0.17低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.50±0.28（t=-4.114，P<0.05），DKK-3基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量與性別和年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05）；2 DKK-3基因

6、啟動(dòng)子區(qū)在口腔鱗癌組織中的甲基化率為49.0％（25/51），明顯高于其對(duì)應(yīng)正?？谇火つそM織的甲基化率7.8％（4/51）（χ2=19.273，P<0.05）。同時(shí)，吸煙組的甲基化率64.3%（18/28）高于不吸煙組甲基化率30.4%（7/23）（χ2=5.790，P<0.05）；臨床Ⅰ期、Ⅱ期的甲基化率38.9％（14/36）低于Ⅲ期、Ⅳ期的甲基化率73.3％（11/15）（χ2=5.027，P<0.05）；但是DKK-3基因啟動(dòng)子

7、區(qū)在口腔鱗癌組織中的甲基化率與性別、年齡及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P＞0.05）；3 DKK-3基因發(fā)生甲基化的口腔鱗癌組織mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.30±0.21低于未發(fā)生甲基化的口腔鱗癌組織 mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.51±0.29（t=-2.817，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1口腔鱗癌組織中DKK-3基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量低于正?？谇火つそM織。該結(jié)果提示在口腔鱗癌中DKK-3基因可能是抑癌基因，其表達(dá)下調(diào)或沉默可能導(dǎo)

8、致了口腔癌的發(fā)生與發(fā)展，該基因的異常表達(dá)與吸煙、臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與性別和年齡無(wú)關(guān)。
　　2口腔鱗癌組織中DKK-3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)明顯高于相應(yīng)正?？谇火つそM織。提示DKK-3基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化狀態(tài)可能是口腔癌發(fā)病的重要機(jī)制之一，同時(shí)，該基因啟動(dòng)子的異常甲基化狀態(tài)與吸煙和臨床分期有關(guān)，與性別、年齡及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。
　　3在口腔鱗癌組織中 DKK-3基因 mRNA在甲基化陽(yáng)性病例中的相對(duì)表達(dá)量低于甲