積雪草苷修飾脂質(zhì)體的制備及其大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、目的：積雪草苷（Asiaticoside）是傘形科植物積雪草（Centellaasiatica(L.)Urban.）中的主要有效成分，是一種烏蘇烷型三萜皂苷。研究顯示，其可以通過抑制IL-4，TNF-α與TNF-β1的表達(dá)，降低Smad-3的生成，提高A2AR的表達(dá)來抑制肺組織炎癥，從而改善肺組織纖維化的進(jìn)程。但積雪草苷水溶性較差，體內(nèi)消除半衰期短，直接注射會(huì)產(chǎn)生一定毒副作用，這使其應(yīng)用受到一定限制。
　　脂質(zhì)體（Liposome

2、s）是由磷脂和膽固醇組成，具有類似生物膜的雙分子層結(jié)構(gòu)的超微球型載體制劑，其可以改變藥物的體內(nèi)分布、提高療效、降低毒副作用、延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間。但是，單純脂質(zhì)體的被動(dòng)靶向性不強(qiáng)，為了獲得更好的器官靶向作用的脂質(zhì)體，通常根據(jù)器官的特征選擇修飾劑對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行表面修飾。D-甘露糖能被肺泡表面活性物質(zhì)蛋白A和D識(shí)別，而十八胺的添加可改變脂質(zhì)體的表面電荷，使其荷正電，從而使制得的陽離子脂質(zhì)體趨向于肺部聚集。因此本研究通過將積雪草苷制備成脂質(zhì)體，并用

3、D-甘露糖與十八胺進(jìn)行修飾，以期增加積雪草苷的水溶性和靶向性，并延長(zhǎng)其消除半衰期，最終獲得積雪草苷肺靶向脂質(zhì)體制劑。
　　方法：建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定積雪草苷的含量，對(duì)液相條件的穩(wěn)定性、重復(fù)性、精密度等進(jìn)行考察。使用微柱離心法測(cè)定積雪草苷脂質(zhì)體（ASI-L）的包封率，優(yōu)化微柱柱高及離心轉(zhuǎn)速等條件。
　　分別采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸發(fā)法以及醋酸鈣梯度法制備ASI-L，以包封率為指標(biāo)，選擇最優(yōu)制備方法。用D

4、-甘露糖對(duì)ASI-L進(jìn)行修飾，得到積雪草苷修飾脂質(zhì)體（D-ASI-L）。對(duì)制備工藝和處方組成進(jìn)行單因素考察，從中選擇出3個(gè)因素作為星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法的考察對(duì)象，以包封率與載藥量為指標(biāo)，將二者統(tǒng)一為總評(píng)歸一值（OD），對(duì)結(jié)果采用多元非線性模型進(jìn)行擬合，根據(jù)OD的大小優(yōu)選處方，預(yù)測(cè)最優(yōu)處方的包封率與載藥量，并對(duì)最佳處方進(jìn)行驗(yàn)證。
　　添加十八胺得到積雪草苷陽離子脂質(zhì)體（C-ASI-L）。采用含0.1％十二烷基硫酸鈉（SDS）的PB

5、S作為溶出介質(zhì)，建立HPLC法測(cè)定溶出介質(zhì)中積雪草苷的濃度，考察積雪草苷溶液（ASI-S）、ASI-L、D-ASI-L與C-ASI-L的體外釋放特性，繪制溶出曲線，并采用不同模型進(jìn)行擬合，比較各制劑間的差異。
　　建立測(cè)定血漿中積雪草苷濃度的HPLC法，考察SD大鼠經(jīng)尾靜脈注射給藥后，ASI-S、ASI-L、D-ASI-L與C-ASI-L在不同時(shí)間點(diǎn)下的血藥濃度，繪制藥時(shí)曲線，并對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行模型擬合，計(jì)算相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

6、r>　　進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，觀察積雪草苷在不同溫度與光照條件下外觀改變，同時(shí)測(cè)定脂質(zhì)體的泄漏率，初步考察積雪草苷脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：本研究建立了測(cè)定積雪草苷含量的HPLC法，方法準(zhǔn)確可靠，可用于計(jì)算脂質(zhì)體的包封率。微柱離心法分離游離藥物與脂質(zhì)體，精確度高，重現(xiàn)性好，在所選定條件下，脂質(zhì)體過柱率可達(dá)95%以上，滿足脂質(zhì)體包封率測(cè)定的要求。
　　對(duì)四種制備方法的考察表明，薄膜分散法制備的ASI-L包封率最高。通過對(duì)D

7、-ASI-L的工藝和處方進(jìn)行單因素考察，確定星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法考察的3個(gè)因素分別為積雪草苷與磷脂之比（m/m，X1）、膽固醇與磷脂之比（m/m，X2）、D-甘露糖的濃度（g·mL-1，X3）。以O(shè)D值為指標(biāo)，確定最優(yōu)處方為：X1=0.07、X2=0.17、X3=0.03g·mL-1，通過擬合方程計(jì)算得到的最優(yōu)處方的包封率為75.692%，載藥量為2.533%，而驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)得到的包封率為（75.529±1.071）%（n=3），載藥量為（2

8、.539±0.029）%（n=3），與預(yù)測(cè)值的偏差分別為-0.217%與0.205%，表明該處方工藝穩(wěn)定，實(shí)際值與預(yù)測(cè)值相符合。
　　體外釋放實(shí)驗(yàn)表明，將積雪草苷制成脂質(zhì)體制劑后，緩釋作用明顯且釋放完全。釋放12h后，ASI-S的累計(jì)釋放率可達(dá)89.13%，72h后，ASI-L、D-ASI-L、C-ASI-L的累計(jì)釋放率分別為87.58%、94.12%、94.46%。結(jié)果表明D-甘露糖與十八胺的修飾對(duì)ASI-L的釋放無顯著影響。A

9、SI-L的體外釋放模型擬合結(jié)果符合一級(jí)模型，而ASI-L、D-ASI-L、C-ASI-L的體外釋放模型擬合結(jié)果符合Weibull模型。全部劑型經(jīng)Weibull模型擬合后，釋放63.2%所需時(shí)間td分別為3.17h、37.17h、34.05h、39.97h。
　　大鼠的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，相較于溶液，積雪草苷脂質(zhì)體制劑的緩釋作用明顯。使用PKSolver2.0對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行房室擬合，根據(jù)AIC值最小的原則，ASI-S、ASI-L、D

10、-ASI-L、C-ASI-L最符合權(quán)重為1/C2的單室模型。ASI-S的消除半衰期（t1/2）為14.52±0.56min，ASI-L、D-ASI-L與C-ASI-L的t1/2分別為ASI-S的的6.98、10.31、10.99倍。ASI-S的清除率（CL）為10.43±0.83mL·min·μg-1，而ASI-L、D-ASI-L與C-ASI-L的CL分別為0.36±0.05mL·min·μg-1、0.22±0.03mL·min·μg-

11、1、0.31±0.03mL·min·μg-1。ASI-S的藥-時(shí)曲線下面積（AUC）為1929.70±159.00min·μg·mL-1，ASI-L、D-ASI-L與C-ASI-L的AUC分別是ASI-S的的29.54、48.58、33.55倍。3種脂質(zhì)體制劑間進(jìn)行比較，ASI-L的t1/2較其余二者偏低，3種脂質(zhì)體的CL無顯著性差異，而D-ASI-L的AUC值顯著高于其余兩種脂質(zhì)體。
　　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，光照與溫度對(duì)積雪草苷各脂