肝癌細胞MGMT表達水平與奧沙利鉑敏感性的相關性.pdf

1、目的:探討肝癌細胞MGMT表達水平與OXA敏感性的相關性。
　　方法:采用體外培養(yǎng)肝癌細胞株Bel-7402、SMMC-7721、HUH-7。用RT-PCR法檢測MGMT的mRNA表達水平；Western-Blot方法檢測MGMT蛋白的基礎表達水平；MTT法計算各肝癌細胞的IC50；對比肝癌細胞MTT，并通過甲基化特異性PCR，檢測所有細胞的MGMT甲基化的狀態(tài)；Western-Blot方法檢測加OXA后r-H2Ax的表達來評價D

2、NA損傷程度；流式細胞儀檢測細胞凋亡。
　　結果:各肝癌細胞系均可檢測到MGMT基因和蛋白的表達，其中HUH-7 MGMT的mRNA以及蛋白水平最高；而Bel-7402的MGMT的mRNA以及蛋白水平最低，且三者的MGMT蛋白水平與mRNA水平呈正相關。根據(jù)MTT結果計算出HuH-7、SMMC-7721、Bel-7402對OXA的IC50分別為246.76μg/ml、48.43μg/ml以及31.35μg/ml，根據(jù)相關性分析得出

3、MGMT的mRNA及蛋白表達水平與IC50呈正相關，即MGMT表達水平越高，其IC50值越大。MGMT的甲基化結果顯示HuH-7的MGMT的甲基化表達水平最低，Bel-7402的MGMT的甲基化表達水平最高，根據(jù)相關性分析得出MGMT啟動子甲基化水平與MGMT的mRNA與蛋白水平以及IC50呈負相關。加OXA12h后r-H2Ax均有不同程度表達，其中Bel-7402的r-H2Ax升高最明顯而HuH-7升高最少。流式細胞儀檢測凋亡，顯示加