ddPCR檢測乳腺癌HER2表達(dá)與病理特征及中醫(yī)證型的相關(guān)性分析.pdf

1、目的:
　　對比微滴式數(shù)字PCR技術(shù)(droplet digital PCR，ddPCR)與免疫組織化學(xué)(IHC)聯(lián)合熒光原位雜交(FISH)檢測浸潤性乳腺癌人類表皮生長因子受體2(HER2)基因的符合率，評估微滴式數(shù)字PCR技術(shù)檢測HER2的應(yīng)用價值，進(jìn)而分析HER2基因擴(kuò)增與乳腺癌其他病理學(xué)指標(biāo)及中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性，為臨床診療及預(yù)后判斷提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1.通過廣東省中醫(yī)院住院病歷系統(tǒng)及華海病理系統(tǒng)

2、，收集從2012年7月至2013年12月就診于廣東省中醫(yī)院的120例經(jīng)病理組織學(xué)確診為浸潤性乳腺癌的病例，從中篩選出110例具有完整術(shù)后病理資料的病例納入研究。
　　2.對入選標(biāo)本HER2基因行IHC檢測，對IHC積分為2+的病例行FISH檢測;
　　3.應(yīng)用微滴式數(shù)字PCR技術(shù)對110例浸潤性乳腺癌經(jīng)IHC檢測評分為0，1+，2+，3+的標(biāo)本進(jìn)行HER2基因擴(kuò)增檢測;
　　4.對所有標(biāo)本的雌激素受體(ER)、孕激素受

3、體(PR)、腫瘤細(xì)胞增殖因子（Ki-67）行IHC檢測。
　　5.應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析HER2表達(dá)量與年齡、腫瘤類型、腫瘤大小、組織學(xué)分級、Luminal分型、ER、PR、Ki-67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)、有無絕經(jīng)、中醫(yī)辨證分型之間的相關(guān)性。當(dāng)比較微滴式數(shù)字PCR與IHC聯(lián)合FISH檢測HER2的符合率時，則使用Kappa進(jìn)行一致性檢驗;當(dāng)探討ddPCR測得的HER2表達(dá)量與其他臨床病理學(xué)指標(biāo)及中醫(yī)證型的相關(guān)性時，則使用Sp

4、earman相關(guān)性分析;當(dāng)研究乳腺癌中醫(yī)證型與乳腺癌預(yù)后因素的相關(guān)性時，則使用卡方檢驗。
　　結(jié)果:
　　1.HER2基因的IHC檢測結(jié)果53例為0/1+;32例2+;25例為3+。32例IHC2+標(biāo)本經(jīng)FISH檢測，8例陽性，24例陰性。
　　2.110例入組病例中，HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞的ddPCR值31例≥3.2，即使用ddPCR檢測出HER2基因的陽性表達(dá)率為28.18％(31/110)，79例標(biāo)本HER2拷貝數(shù)

5、/細(xì)胞的ddPCR值＜3.2，即使用ddPCR檢測出HER2基因的陰性表達(dá)率為71.82％(79/110)。
　　3.ddPCR與IHC&FISH檢測的陽性結(jié)果符合率93.9％(31/33)，ddPCR與IHC&FISH陰性結(jié)果符合率100％(77/77)。兩種方法一致性較好，Kappa值為0.96，P＜0.01。
　　4.本組ER/PR的陽性表達(dá)率分別為69.1％和45.5％，Ki-67高表達(dá)率60.0％。
　　5.

6、Her-2定量表達(dá)與腫瘤大小呈正相關(guān)（rs=0.224，P＜0.05）、與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.215，P＜0.05）、與組織學(xué)分級呈正相關(guān)（rs=0.261，P＜0.01），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)呈正相關(guān)(rs=0.172，P＜0.05)，與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.417，P＜0.01)、與PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.353，P＜0.01)，與TNM分期呈正相關(guān)(rs=0.335，P＜0.01)，與Luminal分型呈正

7、相關(guān)(rs=0.266，P＜0.01)，與年齡、腫瘤類型及絕經(jīng)狀態(tài)無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。
　　6.經(jīng)Spearman相關(guān)性檢驗，乳腺癌中醫(yī)證型與年齡相關(guān)(rs=0.219，P＜0.05)，經(jīng)卡方檢驗，與ER表達(dá)相關(guān)(x2=39.415，P＜0.01)，與TNM分期相關(guān)(x2=32.410，P＜0.05)，與HER2、PR、Ki-67表達(dá)，組織學(xué)分級無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.使用微滴式數(shù)

8、字PCR技術(shù)能成功檢測出乳腺癌HER2基因的擴(kuò)增狀態(tài)，并且其結(jié)果與傳統(tǒng)方法(IHC聯(lián)合FISH)一致性較好，陽性符合率為93.9％(31/33)，陰性符合率為100％(77/77)。
　　2.HER2基因定量表達(dá)與腫瘤直徑大小、Ki-67表達(dá)、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)、TNM分期、Luminal分型呈正相關(guān);與ER、PR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān);與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤類型無顯著相關(guān)性。
　　3.乳腺癌中醫(yī)證型與患者年齡分布、ER表達(dá)