組織特異性干預小鼠鞏膜PPARα對小鼠屈光發(fā)育的影響.pdf

1、目的:
　　近視是發(fā)病率高的屈光不正，近年來近視人數(shù)日益增多，但其發(fā)病機制未明。有研究發(fā)現(xiàn)PPARα激動劑玻腔注射可以抑制小雞鏡片誘導性近視形成，本實驗室研究也發(fā)現(xiàn)球旁注射PPARα激動劑非諾貝特及GW7647可以抑制豚鼠形覺剝奪性近視的形成;這些均表明PPARα可能參與了對近視的調(diào)控。本實驗室通過RNA-sequence研究也發(fā)現(xiàn)形覺剝奪小鼠鞏膜內(nèi)PPARα及其下游靶基因的表達下調(diào)，提示形覺剝奪性近視過程中伴隨著PPARα通路活

2、性的下降。在此基礎上，本實驗室引進了PPARα全身敲除的小鼠，發(fā)現(xiàn)PPARα缺失可誘導小鼠屈光發(fā)育顯著向近視方向偏移，說明PPARα參與了小鼠屈光發(fā)育及正視化的調(diào)節(jié)。鞏膜作為最終的效應器官，在近視過程中普遍會發(fā)生胞外基質重塑的過程。通過對PPARα敲除小鼠模型的研究，本課題組也發(fā)現(xiàn)PPARα全身敲除小鼠鞏膜膠原表達顯著低于同窩仔野生型小鼠。在原代培養(yǎng)的鞏膜成纖維細胞上我們也發(fā)現(xiàn)PPARα激動劑非諾貝特可以顯著抑制細胞中膠原的合成。因此，

3、為明確鞏膜PPARα在近視形成中的調(diào)控作用，本研究擬通過特異性干預鞏膜PPARα，明確鞏膜PPARα對小鼠屈光發(fā)育的調(diào)控作用。
　　方法:
　　采用出生后21日齡的野生型(willdtype，WT)雄性近交C57BL6小鼠作為實驗動物。將經(jīng)過屈光等參數(shù)篩選出的小鼠隨機分為三組:正常對照組，不做任何處理;對照病毒組，右眼注射病毒;包裝目的序列的病毒組，右眼注射病毒。采用Tenon's囊下病毒注射方式，分別注射PPARα過表達病

4、毒和shRNA敲減病毒兩種不同的病毒。通過實時定量PCR檢測病毒注射的有效性和特異性，并檢測鞏膜Ⅰ型膠原的變化情況。
　　結果:
　　(1) Tenon's囊下注射過表達病毒后，注射病毒眼的鞏膜PPARα轉錄水平顯著增加，鞏膜膠原及PPARα下游靶基因mRNA水平?jīng)]有明顯變化;小鼠屈光發(fā)育沒有明顯變化，眼軸沒有明顯變化;(2)與對側眼相比，Tenon's囊下注射AAV8-shPPARα病毒2，4周后，小鼠注射眼屈光顯著向近視

5、方向偏移（2周:注射眼-2.47±0.45D vs.對側眼-0.26±0.05，p＜0.01;4周:注射眼-0.79±0.14 vs.對側眼2.56±0.47，p＜0.001）;與對側眼相比，注射病毒眼的眼軸、前房深度、玻璃體腔深度、晶體厚度、角膜前后表面曲率均沒有明顯變化。與對側眼相比，注射AAV8-Scarmble病毒組注射眼屈光、眼軸等參數(shù)變化不明顯。
　　結論:
　　組織特異性過表達鞏膜PPARα對小鼠的屈光發(fā)育沒有