微粒皮方向性對移植存活率的影響及改進方法.pdf

1、目的：
　　大面積燒傷，尤其是特大面積深度燒傷是燒傷外科醫(yī)師永恒的命題。大面積創(chuàng)面裸露常常導(dǎo)致機體超高代謝、膿毒血癥、多器官功能衰竭等一系列并發(fā)癥，危及患者生命。因此，如何盡早、盡快地封閉創(chuàng)面是提高特大面積深度燒傷患者救治成功率的關(guān)鍵點。常規(guī)的皮片移植方法主要包括:自體大張皮移植、郵票皮移植、網(wǎng)狀皮移植。上述幾種方法雖然移植后皮片容易存活，瘢痕形成較輕，功能和外觀比較滿意，但是擴展面積過小，難以在短時間內(nèi)利用僅有的皮源修復(fù)大面積裸

2、露創(chuàng)面。目前常用于修復(fù)大面積燒傷創(chuàng)面的方法主要包括:自體表皮細胞培養(yǎng)移植、Meek植皮、微粒皮移植、混合移植等。自體表皮細胞培養(yǎng)移植所需自體皮源較少，擴展面積大，理論上可擴增1000～10000倍，極大程度地利用了僅有的自體皮源。但是移植后的表皮細胞膜片由于缺乏真皮成份，移植至創(chuàng)面后存活率較低，且創(chuàng)面愈合后瘢痕增生較為明顯，新生皮膚容易再次破潰，形成新的創(chuàng)面，對外觀和功能影響較大，此外該方法需要進行細胞體外培養(yǎng)，時間過長、費用較高，臨床

3、實用性不高。Meek植皮術(shù)為半機械化操作，省時、省力，創(chuàng)面愈合后外觀較好，但自體皮擴展比例有限。混合移植存活率可靠，但多為人工操作，費時、費力。微粒皮移植技術(shù)可將自體皮擴展10～20倍，充分利用了自體有限皮源，自誕生30年來已成為修復(fù)特大面積深度燒傷創(chuàng)面的主要方法之一。然而，由于難以控制移植后微粒皮的方向性，導(dǎo)致存活率并不穩(wěn)定，國內(nèi)各家醫(yī)院所報道的移植存活率差異較大。
　　本研究首次通過自制膠原膜改變微粒皮方向性以提高移植存活率，

4、從而為臨床特大面積深度燒傷創(chuàng)面的修復(fù)提供存活率高而穩(wěn)定可靠的方法。
　　方法：
　　1.證明微粒皮方向性對移植存活率的影響
　　1.1 微粒皮切割刀具的制備
　　10組圓形刀片平行排列，間距為1mm，制備成滾軸切割刀具，1次十字切割后即可制備符合標準的微粒皮（大小為1mm×1mm）。
　　1.2 裸鼠微粒皮移植實驗
　　將人包皮（厚度約0.2mm～0.3mm）以自制的微粒皮切割刀具進行十字切割，制備成

5、微粒皮（大小約1mm×1mm），移植于裸鼠全層皮膚切除創(chuàng)面，觀察微粒皮方向性對移植存活率的影響，計算創(chuàng)面愈合率，并行HE染色、Masson染色觀察細胞浸潤和膠原排列情況，以及免疫組化HLA-ClassⅠ染色觀察人來源細胞存留情況。
　　2.自制膠原膜、檢測物理和生物學(xué)特性、改進鹽水漂浮法
　　2.1 膠原膜制備、組織結(jié)構(gòu)特性檢測
　　以比目魚皮提取膠原，真空冷凍干燥，制成膠原膜。行組織切片HE染色以及掃描電鏡觀察膠原膜

6、組織結(jié)構(gòu)特點。測定其密度及漂浮性能。
　　2.2 膠原膜毒性實驗
　　將膠原膜浸提液與人成纖維細胞懸液混合培養(yǎng)，測定OD（吸光度）值，計算細胞相對增殖率。
　　2.3 微粒皮漂浮實驗
　　將膠原膜粘附至微粒皮表皮面，置于等滲生理鹽水中進行漂浮，然后以綢布轉(zhuǎn)移至大張同種異體皮上，計算漂浮率、正向（表皮面朝上）漂浮率及同向轉(zhuǎn)移率（轉(zhuǎn)移后微粒皮真皮面朝上的比例）。
　　3.驗證通過膠原膜改變微粒皮方向性的方法對提

7、高移植存活率的作用
　　將表皮面粘附膠原膜的豬微粒皮移植于豬全層皮膚切除創(chuàng)面，觀察創(chuàng)面愈合情況，并分別于移植后第2、3、4周留取創(chuàng)面照片，結(jié)合圖像處理軟件(MetaFluo)計算創(chuàng)面愈合率以及收縮率。并行HE染色觀察細胞浸潤情況及Masson染色觀察膠原排列情況。
　　結(jié)果：
　　1.微粒皮表皮面朝上移植于裸鼠創(chuàng)面，2、3、4周時創(chuàng)面愈合率明顯高于表皮面一半朝上一半朝下組及表皮面朝下組（54.75±3.05％ VS44

8、.85±2.76％ and35.85±2.87％、84.80±3.17％ VS74.85±2.80％ and45.25±2.29％、94.80±2.78％ VS84.95±2.96％ and55.90±2.00％)(P＜0.01)。
　　2.粘附膠原膜的豬微粒皮在生理鹽水中的漂浮率及正向（表皮面朝上）漂浮率分別為95.05±2.09％、91.25±2.88％，明顯高于單純豬微粒皮組（52.20±5.93％、68.05±4.65％）

9、(P＜0.01)。
　　3.粘附膠原膜的微粒皮與單純的微粒皮相比，移植后4周創(chuàng)面收縮率明顯減?。?2.45±2.01％ VS20.05±2.11％）、創(chuàng)面愈合率明顯提高(95.15±2.28％ VS65.05±2.33％)(P＜0.01)，創(chuàng)面愈合后皮下及真皮層內(nèi)未見表皮囊腫樣結(jié)構(gòu)形成。
　　結(jié)論：
　　1.當制備的微粒皮（厚度為0.2mm～0.3mm）大小為1mm×1mm、移植擴大10倍時，微粒皮的方向性顯著影響移植