廣西某地淡水魚(yú)吸蟲(chóng)囊蚴鑒別及其華支睪吸蟲(chóng)感染大鼠致肝膽病理和細(xì)胞因子改變.pdf

1、目的：
　　了解廣西橫縣魚(yú)類(lèi)吸蟲(chóng)感染的蟲(chóng)種，評(píng)價(jià)形態(tài)學(xué)結(jié)合ITS2序列分析鑒定吸蟲(chóng)囊蚴的有效性。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染華支睪吸蟲(chóng)后給予促癌藥物在短時(shí)間內(nèi)（3～6個(gè)月）探索華支睪吸蟲(chóng)可能的誘癌因素。
　　方法：
　　采集橫縣某水庫(kù)小魚(yú)，采用人工消化法消化收集囊蚴，在解剖鏡下分撿單個(gè)囊蚴，按形態(tài)學(xué)特征鑒定分類(lèi)，提取不同形態(tài)囊蚴的DNA后進(jìn)行ITS序列PCR擴(kuò)增和測(cè)序，獲得的序列在NCBI上進(jìn)行Blast分析，獲得完整的ITS2

2、序列后并用Mega6.0.6軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠灌胃感染華支睪吸蟲(chóng)囊蚴后，在感染不同時(shí)間段對(duì)大鼠斷尾采血提取血清，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和實(shí)驗(yàn)試劑的量取部分血清運(yùn)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）試劑盒檢測(cè)血清中細(xì)胞色素P4502E1（CYP2E1）、細(xì)a胞色素P4502A6（CYP2A6）、糖類(lèi)抗原199（CA199）、甲胎蛋白（AFP）、脂質(zhì)過(guò)氧化物酶(Lipo-xy genase LPO)、白介素6（IL-6）的OD值，利用標(biāo)準(zhǔn)品OD

3、值和相應(yīng)濃度做出標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)，從而可得到每個(gè)檢測(cè)出的OD值所對(duì)應(yīng)的相應(yīng)血清濃度，并做柱狀圖描述不同時(shí)間血清物質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化；同時(shí)對(duì)血清濃度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠分兩次解剖，每次各解剖每組的一半，分別在感染大鼠100天后、150天后解剖，均取肝臟
　　做H-E病理切片觀察膽管和肝組織的變化，同時(shí)對(duì)照各組病理切片中病理組織的變化。
　　結(jié)果：
　?。?）廣西橫縣某水庫(kù)小型魚(yú)類(lèi)攜帶吸蟲(chóng)囊蚴的分子生物學(xué)初步檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，形態(tài)學(xué)鑒別表明

4、，橫縣某水庫(kù)小魚(yú)感染有5種不同形態(tài)的囊蚴；結(jié)合I TS2序列分析表明，這5種囊蚴鑒定為4類(lèi)不同的吸蟲(chóng)：華支睪吸蟲(chóng)（clonor chis sinensis）、鉤棘單睪吸蟲(chóng)(Haplorchis pumilio)、臺(tái)灣棘帶吸蟲(chóng)(Centrocestus formosanus)和日本全冠吸蟲(chóng)（Holostephanus dubinini），其中有兩種不同形態(tài)的吸蟲(chóng)囊蚴分子鑒定均為華支睪吸蟲(chóng)囊蚴。（2）感染華支睪吸蟲(chóng)能引起大鼠CYP2E1、I

5、L-6濃度增高，感染華支睪吸蟲(chóng)大鼠中CA199、AFP、CYP2A6、LPO濃度檢測(cè)經(jīng)統(tǒng)計(jì)F檢驗(yàn)P>0.05沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雖然定量檢測(cè)出CA199、AFP、C YP2A6、LPO沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但并不能說(shuō)明華支睪吸蟲(chóng)感染后對(duì)這幾個(gè)細(xì)胞因子沒(méi)有影響，有可能是感染時(shí)間上還沒(méi)有達(dá)到，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠分兩次解剖，每次各解剖每組的一半，分別在感染大鼠100天后、150天后解剖，均取肝臟做H-E病理切片觀察肝組織的變化，病理切片結(jié)果表明華支睪吸蟲(chóng)感染后

6、能引起肝細(xì)胞水腫，變性甚至輕微壞死，同時(shí)引起膽管匯管區(qū)輕度增寬，小膽管增多，間質(zhì)纖維化，散在淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)，且可見(jiàn)有膽管異型增生。已有發(fā)現(xiàn)肝硬化、肝癌和膽管癌的癌前變化，我們不能否認(rèn)如果病情繼續(xù)發(fā)展可能將引起肝癌的發(fā)生。
　　結(jié)論：（1）在橫縣某水庫(kù)小魚(yú)中檢出4種吸蟲(chóng)囊蚴，分別為華支睪吸蟲(chóng)、臺(tái)灣棘帶吸蟲(chóng)、鉤棘單睪吸蟲(chóng)和日本全冠吸蟲(chóng)。僅靠形態(tài)學(xué)上鑒定吸蟲(chóng)囊蚴種類(lèi)有一定的缺陷，形態(tài)學(xué)結(jié)合ITS2序列分析可有效避免這些缺陷。（2）華支睪吸