小檗堿對NAFLD大鼠肝組織p38MAPK-STAT3信號通路mRNA及蛋白表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過高脂飲食誘導(dǎo)建立NAFLD大鼠模型,觀察小檗堿對NAFLD大鼠肝組織p38MAPK-STAT3信號通路相關(guān)基因及蛋白表達的調(diào)控作用,探討小檗堿防治NAFLD的作用機制。
  方法:
  24只SPF級健康雄性SD大鼠,體重200g±20g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后按隨機數(shù)字表法隨機分為3組,每組8只。分別為:正常對照組,模型組和小檗堿組。NAFLD大鼠模型的建立:正常組予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),其余兩組均以高脂飼料喂養(yǎng)(

2、基礎(chǔ)飼料88%,豬油10%,膽固醇1.5%,膽鹽0.5%)。在NAFLD大鼠模型建立的同時,小檗堿組以鹽酸小檗堿[100 mg·kg-1·d-1]灌胃進行干預(yù),正常組和模型組大鼠分別給予相應(yīng)的實驗動物飲用水[10 mL·kg-1·BW]進行灌胃,每天1次,連續(xù)8w。各組動物均自由飲水進食。8w末各組大鼠取肝組織行HE染色和油紅O染色觀察其病理學(xué)變化,全自動生化儀檢測肝組織勻漿TC、TG含量;血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST

3、及ALT改變;分別采用WST-1、TBA法檢測肝組織及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;實時熒光定量RT-PCR法檢測肝組織p38MAPK、STAT3mRNA表達量;Western Blot方法檢測肝組織p38MAPK、STAT3及p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表達水平。
  結(jié)果:
  1肝組織病理
 ?。?)H&E染色示:正常組大鼠肝小葉、肝索結(jié)構(gòu)清晰完整,肝細胞質(zhì)均勻紅染,胞核大而圓,位

4、置居中,形態(tài)正常,細胞無明顯的脂肪空泡;模型組大鼠肝組織切片示肝竇、肝索結(jié)構(gòu)紊亂不清,胞漿內(nèi)可見大小不一的圓形脂滴,以大泡性脂滴為主,脂肪變性明顯,胞核被擠壓靠邊;小檗堿組大鼠肝組織切片在肝細胞形態(tài)、肝索結(jié)構(gòu)、脂肪變性等方面情況較模型組有顯著改善。
  (2)油紅O染色示:正常組大鼠肝細胞排列整齊、間隙清晰,細胞肝竇結(jié)構(gòu)完整清晰,細胞核淡藍居中,肝細胞內(nèi)無明顯大片橘紅色脂滴;模型組大鼠肝細胞腫脹變形,肝細胞內(nèi)可見大片的紅染脂滴,相

5、鄰細胞間紅染融合,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝索不清,細胞核深藍染色、多被脂滴擠壓、向邊緣靠攏;小檗堿組肝細胞內(nèi)脂滴紅染、肝索結(jié)構(gòu)紊亂等情況介于正常組與模型組之間。
  2生化指標
 ?。?)血脂、肝脂含量測定
  血脂:與正常組相比,模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量顯著升高(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量顯著降低(P<0.01);與模型組相比,小檗堿組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量降低顯著(P<0.0

6、5),HDL-C含量升高顯著(P<0.05)。肝脂:與正常組相比,模型組大鼠肝組織TC、TG含量顯著升高(P<0.01,P<0.05),與模型組相比,小檗堿組大鼠肝組織TC、TG含量顯著降低(P<0.01,P<0.05)。
 ?。?)血清AST、ALT含量及AST/ALT比值
  與正常組相比,模型組大鼠血清AST含量升高明顯(P<0.05),ALT含量雖有所增高,但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),AST/ALT也有升高,

7、但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較,小檗堿組AST含量下降明顯(P<0.05),ALT含量下降無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),AST/ALT比值降低無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
  3氧化應(yīng)激因子測定
  與正常組比較,模型組大鼠肝組織及血清SOD活力明顯降低(P<0.01);與模型組比較,小檗堿組肝組織及血清SOD活力明顯升高(P<0.01,P<0.05)。與正常值比較,模型組大鼠肝組織及血清MDA水平明顯升高(

8、P<0.01);與模型組比較,小檗堿組的MDA水平顯著降低(P<0.05,P<0.01)。
  4肝組織p38MAPK、STAT3mRNA、p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白表達水平
  模型組大鼠肝組織p38MAPK及STAT3 mRNA的表達較正常組明顯上升(P<0.05,P<0.01)。小檗堿組大鼠肝組織p38MAPK及STAT3 mRNA表達水平較模型組明顯下降(P<0.05)。

9、>  模型組大鼠肝組織p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白的表達水平較正常組顯著升高(P<0.05);小檗堿組大鼠p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表達量較模型組顯著下降(P<0.05),p38MAPK、STAT3蛋白表達水平較模型組也有明顯下調(diào),但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
  結(jié)論:
  (1)通過高脂飼料對SD大鼠喂養(yǎng)8w能夠成功建立NAFLD大鼠模型。
  (2)NAF

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