枸杞多糖通過PPARγ調(diào)節(jié)脂肪細胞功能的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  近年來,隨著經(jīng)濟的發(fā)展及生活方式的改變,肥胖的發(fā)生率在全球范圍內(nèi)迅速增加,尤其我國肥胖率在2014年已高達11%。肥胖屬于一種代謝綜合征,往往引起2型糖尿病、心血管疾病、非酒精性脂肪肝及高血壓等的發(fā)生,嚴重威脅人類的健康。越來越多的學者關(guān)注肥胖形成的機制研究,發(fā)現(xiàn)過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptorsγ,PPARγ)在肥胖的發(fā)生與發(fā)展中起著關(guān)鍵

2、性作用。已證實PPARγ屬于配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子,在脂肪生成、脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用,并且在能量代謝調(diào)節(jié)中扮演著重要的角色。我們課題組前期通過形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn),枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)可以明顯減小高脂喂養(yǎng)小鼠模型中脂肪細胞的大小。因此,我們提出假設(shè),LBP是否通過PPARγ改善高脂誘導(dǎo)的肥胖及其可能的分子作用機制。
  方法:
  1.釆用高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6

3、小鼠建立體內(nèi)肥胖模型,選取40只雄性C57BL/6小鼠(周齡:6-8周;體重:18-20克),隨機分為4組:普食組、高脂組、100mg/kg LBP+高脂組及200mg/kg LBP+高脂組。每周監(jiān)測體重、飲食及飲水量,持續(xù)喂養(yǎng)24周,禁食8小時,收集血清及腹部白色脂肪組織,通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、熒光實時定量PCR(qRT-PCR)等方法檢測肥胖相關(guān)的生理生化指標。
  2.采用棕櫚酸(palmitic acid,PA

4、)孵育成熟的3T3-L1脂肪細胞建立體外肥胖模型。首先,將3T3-L1前體脂肪細胞誘導(dǎo)分化為成熟的3T3-L1脂肪細胞,采用100μg/mL,300μg/mL,600μg/mL,900μg/mL LBP孵育成熟的脂肪細胞24小時,蛋白免疫印跡(western blot)技術(shù)分析磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(P-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B

5、,PKB/AKT)、磷酸化AKT(P-AKT)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(P-JNK)、PPARγ及磷酸化PPARγ(P-PPARγ)的表達水平。
  3.肥胖脂肪細胞模型中,采用10μM PI3K/AKT信號通路抑制劑-LY294002孵育成熟的3T3-L1脂肪細胞1小時;采用20μM JNK信號通路抑制劑-SP600125孵育成熟的3T3-L1脂肪細胞1小時

6、;采用10μM PPARγ激動劑-羅格列酮(rosiglitazone)孵育成熟的3T3-L1脂肪細胞12小時,收集細胞全蛋白,western blot檢測P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表達水平。采用AKT或JNK小分子干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)轉(zhuǎn)染成熟的3T3-L1脂肪細胞24小時,western blot檢測P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-P

7、PARγ/PPARγ的表達水平。
  結(jié)果:
  1.C57BL/6小鼠及3T3-L1脂肪細胞的肥胖模型經(jīng)LBP干預(yù)后,各項肥胖指標均顯著下降。
  2.3T3-L1脂肪細胞的肥胖模型中,P-PPARγ和P-AKT含量降低,P-JNK含量增加。經(jīng)LBP干預(yù)后,P-PPARγ和P-AKT含量增加,P-JNK含量降低。
  3.3T3-L1脂肪細胞的肥胖模型加入PI3K/AKT抑制劑LY294002或轉(zhuǎn)染AKT si

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