高血壓性心臟病左心室心肌表達(dá)差異性蛋白初篩.pdf

1、高血壓（Hypertension）是一種以體循環(huán)動脈血壓升高為主要表現(xiàn)，并能引起心臟、血管、腦和腎臟等器官功能性或器質(zhì)性改變的全身性綜合性疾病，國際范圍內(nèi)的患病率約為25％~30%，是成人患病和死亡的主要原因之一。高血壓性心臟病是高血壓并發(fā)癥中最常見的臨床表現(xiàn)，其分子機(jī)制至今沒有完全闡明。早期基因組學(xué)的研究成果，由于存在著轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后水平調(diào)節(jié)，最終并不一定在蛋白質(zhì)水平上表現(xiàn)出來。而利用免疫組織化學(xué)等方法，僅能對有限個數(shù)的蛋白質(zhì)進(jìn)行

2、有效分析，無法滿足當(dāng)前高通量研究的需求。
　　差異蛋白質(zhì)組學(xué)是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中應(yīng)用最為廣泛的研究方法，該方法通過對比分析機(jī)體不同狀態(tài)或近似物種間機(jī)體表達(dá)蛋白質(zhì)的差異性，從而實(shí)現(xiàn)對機(jī)體內(nèi)代謝調(diào)控的監(jiān)測，探索機(jī)體對內(nèi)外界環(huán)境變化產(chǎn)生反應(yīng)的基本規(guī)律。差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究能夠反應(yīng)機(jī)體蛋白質(zhì)的動態(tài)本質(zhì)，且采用成熟的雙向電泳、質(zhì)譜技術(shù)等，具有廣泛的應(yīng)用前景。但目前的研究大多以動物種系為主，以人體心臟標(biāo)本進(jìn)行高血壓性心臟病蛋白質(zhì)組學(xué)的研究還少

3、有報(bào)道。
　　在法醫(yī)病理學(xué)檢案過程中，涉及大量尸體標(biāo)本，而人體死亡后，尸體通常條件下被放置于-20℃以下環(huán)境中保存。這類尸體保存良好，蛋白質(zhì)等生物大分子降解程度低，能夠?yàn)樯茖W(xué)研究提供大量的實(shí)驗(yàn)材料。且法醫(yī)病理學(xué)檢案中高血壓性心臟病的較高出現(xiàn)率，提供了可靠的檢材來源，為利用人體心肌標(biāo)本進(jìn)行高血壓性心臟病研究提供了前提條件。
　　目的:
　　本研究利用法醫(yī)病理學(xué)實(shí)踐中獲得的人體心臟左心室心肌標(biāo)本，利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，

4、對心肌組織蛋白進(jìn)行全面篩查，尋找與高血壓和高血壓性心臟病相關(guān)的差異性蛋白，建立以人體心臟標(biāo)本進(jìn)行心肌蛋白質(zhì)差異性表達(dá)的研究基礎(chǔ)，同時選取部分蛋白質(zhì)進(jìn)行深入研究，探討其在高血壓和高血壓性心臟病形成過程中的作用，更深入的研究高血壓和高血壓性心臟病提供新的線索。
　　1.建立人體左心室心肌組織表達(dá)蛋白質(zhì)圖譜；
　　2.分析無高血壓、高血壓和高血壓性心臟病狀態(tài)下心肌表達(dá)差異性蛋白質(zhì)；
　　3.選取部分蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，并對鑒

5、定出的蛋白質(zhì)進(jìn)行深入研究，尋找其參與高血壓和高血壓性心臟病形成中的機(jī)制。
　　方法:
　　1.收集保存良好尸體心臟左心室心肌標(biāo)本，并根據(jù)法醫(yī)病理學(xué)檢查結(jié)果結(jié)合研究目的進(jìn)行分組（無高血壓?。∟HT）、單純高血壓?。℉T）及高血壓性心臟病（HHD））；
　　2.三組左心室心肌各100mg，分別提取心肌蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳和質(zhì)譜鑒定，對比分析NHT、HT和HHD心肌差異性蛋白；
　　3.通過免疫印跡技術(shù)（Western

6、-Blotting）和實(shí)時定量PCR技術(shù)（Real-time PCR），對差異性蛋白質(zhì)進(jìn)行回復(fù)驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　1.通過對三組凝膠圖像進(jìn)行兩兩組間對比分析，在 HT3-HHD2對比組蛋白表達(dá)升高67個，降低39個；NHT1-HHD2對比組蛋白表達(dá)升高50個，降低32個；NHT1-NT3對比組蛋白表達(dá)升高98個，降低103個；
　　2.通過質(zhì)譜鑒定，共鑒定出8組蛋白質(zhì)，包括休克蛋白B1（HspB1）、過氧化物氧化還

7、原酶（Prx2）、ATP合成酶（ATP5A1）、纖維蛋白原(FIBB)、抗胰蛋白酶(A1AT)、維生素D鏈接蛋白(VTDB)、絲氨酸蛋白酶抑制劑(Serpin B6)、電壓依賴性陰離子通道蛋白(VDAC1)；
　　3.選取HspB1、Prx2和ATP5A1三心肌差異性蛋白的回復(fù)驗(yàn)證（Western-blot、RT-PCR），結(jié)果與雙向電泳結(jié)果一致；
　　4.熱休克蛋白B1（HspB1）在HT組中的表達(dá)量明顯高于NHT組，在H

8、HD組中的表達(dá)量明顯低于HT組，而HHD組和NHT組中表達(dá)量沒有明顯差異；過氧化物氧化還原酶（Prx2）在HT組中的表達(dá)量明顯高于NHT組，而在HHD組中的表達(dá)量明顯低于NHT和HT組；ATP合成酶α亞基（ATP5A1）在HT和HHD組中的表達(dá)量則均明顯低于NHT組，而在HT和HHD組中的表達(dá)量沒有明顯差別。
　　結(jié)論:
　　1.通過對NHT、HT和HHD左心室心肌組織蛋白進(jìn)行分離，獲得了無高血壓?。∟HT）、單純高血壓?。?/p>

9、HT）及高血壓性心臟?。℉HD）狀態(tài)下人體左心室心肌組織蛋白質(zhì)的雙向電泳圖譜；
　　2.相比NHT組，HT組有98個蛋白質(zhì)表達(dá)升高，103個表達(dá)降低；相比NHT組，HHD組有50個蛋白質(zhì)表達(dá)升高，32個表達(dá)降低；相比HT組，HHD組有67個蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)升高，39個降低；并通過質(zhì)譜對其中8組蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行了鑒定；
　　3.NHT、HT和HHD三組表達(dá)改變的蛋白質(zhì)涉及氧化應(yīng)激，能量代謝等過程；
　　4.本研究發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)點(diǎn)為