Kisspeptin參與多囊卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞孕激素分泌的調(diào)節(jié).pdf

1、背景：
　　多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，其特點(diǎn)是慢性不排卵、雄激素水平過(guò)高和卵巢多囊樣改變，還可能伴有高胰島素血癥、胰島素抵抗、早期2型糖尿病、血脂紊亂、心血管疾病和不孕。PCOS的病理性改變包括促性腺激素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone， GnRH)的分泌脈沖頻率增加、性腺和腎上腺來(lái)源的非甾體激素水平升高、月經(jīng)不調(diào)

2、、高胰島素血癥等。
　　GPR54（G蛋白偶聯(lián)受體54，其編碼基因?yàn)镵ISS-1R）是視紫紅質(zhì)家族成員，2003年de Roux和Seminara同時(shí)發(fā)現(xiàn)了該膜蛋白對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸起到關(guān)鍵的調(diào)控作用。Kisspeptin是GPR54的配體之一，由KISS-1基因編碼合成。該神經(jīng)肽在下丘腦與GPR54結(jié)合后作為重要信號(hào)引發(fā)GnRH峰，被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物中引起促性腺激素分泌的最有效刺激物。Young等發(fā)現(xiàn)PCOS患者kisspep

3、tin的血液基礎(chǔ)水平高于正常女性，由此推測(cè)kisspeptin可能參與PCOS的病理過(guò)程。S.A.Yilmaz等還發(fā)現(xiàn)kisspeptin基礎(chǔ)水平與血清總睪酮、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、游離雄激素指數(shù)和改良Ferriman-Gallwey(mFG)評(píng)分分?jǐn)?shù)呈顯著性正相關(guān)。
　　以往關(guān)于kisspeptin的研究多集中在中樞水平上參與PCOS的病理過(guò)程，在性腺水平上的研究還較少。本實(shí)驗(yàn)比較了PCOS

4、患者和正常女性卵泡微環(huán)境中kisspeptin表達(dá)水平的差異，同時(shí)研究了kisspeptin對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌功能及相關(guān)基因的影響，推測(cè)該多肽可能通過(guò)自分泌和旁分泌方式參與PCOS患者卵巢微環(huán)境病理改變過(guò)程。
　　目的：
　　1.比較PCOS患者和正常女性卵泡液中kisspeptin的蛋白水平以及KISS-1和KISS-1R在顆粒細(xì)胞的表達(dá)豐度，初步探討PCOS患者kisspeptin在蛋白和基因水平上發(fā)生的改變。

5、>　　2.探索kisspeptin及其受體拮抗劑p234分別對(duì)顆粒細(xì)胞系和黃素化顆粒細(xì)胞分泌激素的影響以及對(duì)相關(guān)內(nèi)分泌和代謝基因的影響。
　　方法
　　1.ELISA法檢測(cè)正常女性和PCOS患者取卵當(dāng)天卵泡液中kisspeptin的水平。
　　2.RT-PCR檢測(cè)正常女性和PCOS患者卵泡液中分離出的顆粒細(xì)胞中KISS-1和KISS-1R mRNA的表達(dá)。
　　3.CCK-8法檢測(cè)不同濃度kisspeptin處理

6、后顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。
　　4.ELISA檢測(cè)kisspeptin處理后對(duì)顆粒細(xì)胞分泌雌激素和孕激素的影響。
　　5.RT-PCR檢測(cè)kisspeptin和p234處理后顆粒細(xì)胞內(nèi)分泌和代謝相關(guān)基因表達(dá)水平的變化。
　　6.免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)GPR54蛋白在顆粒細(xì)胞上的表達(dá)
　　結(jié)果：
　　1.PCOS患者取卵日卵泡液kisspeptin水平顯著高于正常女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.與體重正常的

7、女性相比，PCOS患者顆粒細(xì)胞KISS-1 mRNA水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；KISS1R mRNA在PCOS組有升高趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異。
　　3.正常女性中顆粒細(xì)胞KISS-1基因的表達(dá)水平與身體質(zhì)量指數(shù)(BMI）正相關(guān)（r=0.743，P＜0.01），PCOS患者KISS-1 mRNA的表達(dá)與BMI無(wú)相關(guān)性。
　　4.不同水平的kisspeptin對(duì)顆粒細(xì)胞系的生長(zhǎng)影響不同：高濃度的kisspeptin抑制細(xì)胞增殖，

8、低濃度的kisspeptin促進(jìn)細(xì)胞增殖。
　　5.Kisspeptin處理顆粒細(xì)胞系后，顆粒細(xì)胞雌激素和孕激素的分泌無(wú)明顯改變；kisspeptin處理黃素化的顆粒細(xì)胞后，顆粒細(xì)胞分泌雌激素和孕激素增加。
　　6.Kisspeptin分別以600ng/ml和1600ng/ml的刺激濃度處理顆粒細(xì)胞后， StAR mRNA、KISS-1R、β-HSD、LDLR、Adponectin mRNA在處理組和對(duì)照組均無(wú)顯著差異。拮抗

9、劑p234以1600ng/ml的刺激濃度處理顆粒細(xì)胞后，StAR、β-HSD、P450scc、P450arom和LHCG mRNA的表達(dá)和無(wú)刺激物對(duì)照組相比均有下降趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05)，Adipo-R mRNA的表達(dá)升高，且差異有顯著性（P＜0.05），Adponectin、和FSHR mRNA的表達(dá)有升高趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。
　　7.Kisspeptin的受體蛋白GPR54在顆粒細(xì)胞上表達(dá)，定位于細(xì)