慢性充血性心力衰竭大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機(jī)制及芪藶強(qiáng)心膠囊干預(yù)研究.pdf

1、目的:本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，分別采用SD大鼠、Lewis大鼠與Fisher344大鼠冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎方法制作心肌梗死致慢性心衰模型，并用芪藶強(qiáng)心膠囊(QLQX)進(jìn)行干預(yù)，探討模型大鼠下丘腦室旁核(PVN)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH)申經(jīng)元激活及其與交感神經(jīng)活性增強(qiáng)、血流動(dòng)力學(xué)變化、心室重構(gòu)的關(guān)系，同時(shí)觀(guān)察中藥芪藶強(qiáng)心膠囊的干預(yù)作用及可能的機(jī)制。
　　方法:
　　本研究分為以下三部分:
　　1、慢性充血性心力衰

2、竭(CHF)大鼠模型的建立及下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活的研究
　　以L(fǎng)ewis大鼠、Fisher344大鼠和SD大鼠為研究對(duì)象，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支致大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，并將SD大鼠分為正常對(duì)照組(Control)、假手術(shù)組（Sham）、模型組(Model)，Lewis組，F(xiàn)isher344組，共5組，每組15只。造模4周后觀(guān)察各組大鼠生物學(xué)表征，檢測(cè)各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)變化，測(cè)定血液腦利鈉肽(BNP)、血管緊張素

3、Ⅱ(AngⅡ)、去甲腎上腺素(NE)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)與前列腺素E2(PGE2)含量及下丘腦CRH神經(jīng)元、垂體ACTH神經(jīng)元的表達(dá)，對(duì)慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元的激活作用進(jìn)行研究。
　　2、芪藶強(qiáng)心膠囊經(jīng)側(cè)腦室注射對(duì)慢性心力衰竭大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用
　　采用冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎致SD大鼠急性心肌梗死后心力衰竭模型，分為正常對(duì)照組(Control)、假手術(shù)組(Sham)、模型組(Model)，C

4、RH競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑組(αh-CRH)、芪藶強(qiáng)心低劑量組(QLRY-L)、芪藶強(qiáng)心高劑量組(QLRY-H)，共6組，每組15只。造模4周后αh-CRH組、QLRY-L、H組經(jīng)側(cè)腦室打孔連接微量注射泵連續(xù)注射藥物，正常對(duì)照組、假手術(shù)組和模型組給予空白人工腦脊液(aCSF)。給藥4周后測(cè)定各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)，進(jìn)行心臟HE染色，檢測(cè)各組大鼠心重指數(shù)、肺重指數(shù)及梗死區(qū)重/全心重，觀(guān)察芪藶強(qiáng)心膠囊經(jīng)側(cè)腦室給藥對(duì)心衰模型大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用。

5、
　　3、慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機(jī)制及芪藶強(qiáng)心膠囊的干預(yù)作用
　　實(shí)驗(yàn)分組、造模方法及給藥方法同第二部分。給藥4周后，PCR測(cè)定PVN內(nèi)CRH、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)與垂體內(nèi)ACTH的mRNA表達(dá)，ELISA檢測(cè)下丘腦NE、5-羥色胺(5-HT)與血漿PGE2、NE、ACTH的含量，探討炎性因子、神經(jīng)遞質(zhì)與CRH神經(jīng)元激活的關(guān)系及芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)心衰大鼠的干預(yù)作用，

6、對(duì)心衰時(shí)CRH神經(jīng)元激活的相關(guān)機(jī)制及其與交感神經(jīng)過(guò)度激活之間的關(guān)系進(jìn)行闡述。
　　結(jié)果:
　　1、慢性充血性心力衰竭大鼠模型的建立及下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活的研究
　　1.1各組大鼠生物學(xué)表征觀(guān)察
　　正常組與假手術(shù)組大鼠活潑好動(dòng)，毛發(fā)光亮，反應(yīng)靈敏;模型組大鼠出現(xiàn)精神萎頓，毛發(fā)干枯無(wú)光澤，倦怠懶動(dòng)等癥狀，個(gè)別可見(jiàn)毛發(fā)枯黃無(wú)光澤，甚至脫落，精神萎靡不振，對(duì)抗攻擊性行為減少或消失;Lewis組大鼠反應(yīng)稍遲鈍，毛

7、發(fā)枯黃，自主活動(dòng)減少;Fisher344組精神萎靡不振，毛發(fā)枯槁，稀疏脫落，對(duì)抗攻擊性行為消失。
　　1.2各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果
　　與Lewis組比較，F(xiàn)isher344組LVSP、+dp/dtmax降低，LVEDP顯著升高(P＜0.05，P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠LVSP、±dp/dtmax顯著降低，LVEDP明顯升高（P＜0.01）;與模型組比較，Lewis組LVSP、-dp/dtmax升高，LV

8、EDP降低，F(xiàn)isher344組LVSP、+dp/dtmax降低，LVEDP升高(P＜0.05，P＜0.01)。
　　1.3各組大鼠血液BNP、AngⅡ、NE、ACTH與PGE2含量變化
　　與Lewis組比較，F(xiàn)isher344組血液中以上指標(biāo)含量均增加(P＜0.05，P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠以上指標(biāo)含量均顯著增加(P＜0.05，P＜0.01);與模型組比較，Lewis組BNP、ACTH與PGE2含量均減

9、少，F(xiàn)isher344組以上指標(biāo)含量均增加(P＜0.05，P＜0.01)。
　　1.4各組大鼠下丘腦CRH和腦垂體ACTHmRNA表達(dá)變化
　　與Lewis組大鼠比較，F(xiàn)isher344組大鼠以上指標(biāo)表達(dá)水平明顯上升(P＜0.01);與假手術(shù)組比較，模型組大鼠下丘腦CRH和腦垂體ACTHmRNA表達(dá)水平顯著上升(P＜0.01);與模型組比較，Lewis組以上指標(biāo)表達(dá)水平均下降，F(xiàn)isher344組以上指標(biāo)均升高(P＜0.05

10、，P＜0.01)。
　　2、芪藶強(qiáng)心膠囊經(jīng)側(cè)腦室注射對(duì)慢性心力衰竭大鼠心功能及心室重構(gòu)的干預(yù)作用
　　2.1各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果
　　與假手術(shù)組大鼠比較，模型組LVSP與±dp/dtmax顯著降低，LVEDP顯著升高（P＜0.01）;與模型組比較，各給藥組均可顯著升高±dp/dtmax水平，降低LVEDP水平，αh-CRH組、QLRY-H組可明顯升高LVSP水平(P＜0.05，P＜0.01)。
　　2.2各

11、組大鼠心臟HE染色光鏡觀(guān)察
　　正常組與假手術(shù)組心肌組織正常，未見(jiàn)心肌纖維化和炎性細(xì)胞侵潤(rùn)現(xiàn)象。模型組心肌纖維化嚴(yán)重，有大量炎細(xì)胞侵潤(rùn)。各給藥組均可不同程度抑制心肌纖維化，減輕炎細(xì)胞侵潤(rùn)現(xiàn)象。
　　2.3各組大鼠心重指數(shù)、肺重指數(shù)及梗死區(qū)重/全心重結(jié)果
　　與假手術(shù)組比較，模型組以上指標(biāo)數(shù)據(jù)顯著增加(P＜0.01);與模型組比較，αh-CRH組、QLRY-H組可不同程度的降低以上指標(biāo)，QLRY-L組可降低心重指數(shù)、梗死

12、區(qū)重/全心重(P＜0.05，P＜0.01)。
　　3、慢性心衰大鼠下丘腦室旁核CRH神經(jīng)元激活相關(guān)機(jī)制及芪藶強(qiáng)心膠囊的干預(yù)作用
　　3.1各組大鼠下丘腦CRH、TNF-α、nNOS及垂體ACTH的mRNA表達(dá)水平變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組CRH、TNF-α的mRNA表達(dá)水平顯著升高，nNOS mRNA表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組CRH、TNF-α的mRNA表達(dá)水平顯著下降，nNOSmR

13、NA表達(dá)升高，且以αh-CRH組、QLRY-H組變化較為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　3.2各組大鼠下丘腦室旁核NE、5-HT含量的變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組下丘腦室旁核NE、5-HT含量顯著升高(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組下丘腦室旁核NE、5-HT含量顯著下降(P＜0.01)。
　　3.3血漿BNP、NE、ACTH、PGE2含量變化
　　與假手術(shù)組比較，模型組血漿以上指標(biāo)含量均顯著

14、增加(P＜0.01);與模型組比較，各給藥組均可不同程度降低上述指標(biāo)的含量，以αh-CRH組與QLRY-H組較為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、通過(guò)SD大鼠、Lewis大鼠與Fisher344大鼠比較及實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明心衰時(shí)存在PVN內(nèi)CRH神經(jīng)元激活并通過(guò)促進(jìn)交感神經(jīng)活性及炎性因子表達(dá)參與了心衰的發(fā)生發(fā)展。
　　2、研究表明經(jīng)側(cè)腦室給予芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)心衰大鼠心功能有明顯改善作用，并可有效抑制心室