慢性乙型肝炎患者HLA-G+MDSCs亞群分析及臨床意義探討.pdf

1、目的:
　　病毒持續(xù)性感染與機體的免疫功能低下有關(guān)。人類白細胞抗原-G(humanleukocyte antigen G，HLA-G)和髓源抑制性細胞(myeloid derived suppressor cell，MDSCs)在誘導機體免疫耐受中具有重要作用。本研究通過建立六色流式細胞術(shù)，檢測慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B，CHB)患者和正常人群外周血MDSCs(Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+

2、)、HLA-G+ MDSCs及其亞群的表達水平，分析各細胞亞群與CHB患者臨床病理因素的相關(guān)性，探討CHB患者外周血中HLA-G+MDSCs百分比及其臨床意義。
　　方法:
　　1.標本選擇
　　連續(xù)收集2015年6月12日至2015年10月10日在溫州醫(yī)科大學附屬浙江省臺州醫(yī)院就診的50例CHB患者及37例體檢中心正常人群外周血標本，以正常人群外周血標本為對照組。CHB診斷標準參照2000年西安中華醫(yī)學會傳染病與寄生

3、蟲病學會和肝病學分會學術(shù)會議制定的標準[1]。既往有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過6個月，現(xiàn)HBsAg和（或）HBV DNA仍為陽性者，可診斷為慢性HBV感染。根據(jù)HBV感染者的血清學、病毒學、生物化學試驗及其他臨床和輔助檢查結(jié)果，可將慢性乙型肝炎分為HBeAg陽性慢性乙型肝炎:血清HBsAg、HBeAg陽性、抗HBe陰性，HBV DNA陽性，ALT持續(xù)或反復升高，或肝組織學檢查有肝炎病變;HBeAg陰性慢性乙型肝炎:血清HBsAg陽

4、性，HBeAg持續(xù)陰性，抗HBe陽性或陰性，HBV DNA陽性，ALT持續(xù)或反復異常，或肝組織學檢查有肝炎病變。
　　2.病毒學評估
　　2.1乙肝病毒標志物HBsAg，HBeAg，anti-HBs，anti-HBc，anti-HBe，以及HCV，HDV，HIV-1和HIV-2使用熒光酶聯(lián)免疫分析試劑盒完成。
　　2.2商業(yè)化實時定量PCR診斷試劑盒檢測外周血HBV DNA拷貝數(shù)。
　　2.3全自動生化分析儀檢測

5、血清中ALT、AST、ALP、GGT、TBil含量。
　　3.外周血MDSCs，HLA-G+MDSCs及其亞群表達百分比檢測采用流式細胞術(shù)檢測MDSCs，HLA-G+ MDSCs及其亞群在外周血中的表達百分比，所有流式數(shù)據(jù)用FlowJo7.6.1進行分析。
　　4.統(tǒng)計分析
　　應用SPSS17.0(SPSS，Inc.，Chicago，IL)對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。連續(xù)型數(shù)值變量采用獨立樣本Kolmogorov-Smirn

6、ov正態(tài)性檢驗。不同組間MDSCs，HLA-G+ MDSCs及其亞群百分比比較采用Mann-Whitney U檢驗。MDSCs亞群與臨床參數(shù)間的相關(guān)性采用Spearman檢驗。雙尾檢驗p＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.CHB患者和正常對照人群外周血總MDSCs、單核CD14+MDSCs(M-MDSCs)和粒系CD15+ MDSCs(G-MDSCs)表達百分比無顯著性差異(p＞0.05)。
　　2.CHB患

7、者HLA-G+ MDSCs表達百分比顯著高于對照組(3.30％ vs0.40％;p＜0.001)。此外，CHB患者HLA-G+ M-MDSCs(0.99％ vs0.00％;p＜0.001)和HLA-G+ G-MDSCs(0.78％ vs0.00％;p＜0.001)表達百分比也顯著高于對照組。
　　3.CHB患者HLA-G+ G-MDSCs表達百分比與HBV病毒DNA載量呈負相關(guān)(r=-0.310;p=0.032)，且HBeAb陽性

8、患者HLA-G+ G-MDSCs表達百分比顯著高于HBeAb陰性患者（1.13％ vs0.33％;p=0.048）。
　　4.CHB患者HLA-G+ MDSCs表達百分比與ALP水平呈負相關(guān)，G-MDSCs表達百分比與GGT含量呈正相關(guān)(r=0.372;p=0.008)。
　　結(jié)論:
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者外周血中HLA-G+ MDSCs新亞群。該亞群及HLA-G+M-MDSCs、HLA-G+ G-MDSCs在