黃皮葉提取物對(duì)TNF-α分泌的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：研究黃皮葉提取物的抗炎作用及其在TLR4/MyD88/TRAF6信號(hào)通路中對(duì)細(xì)胞炎癥因子的調(diào)控。
　　方法：MTT法檢測(cè)黃皮葉提取物及LPS對(duì)細(xì)胞的抑制率；不同濃度、不同時(shí)間點(diǎn)LPS誘導(dǎo)活化RAW264.7細(xì)胞，復(fù)制炎癥細(xì)胞模型，RT-PCR、ELISA法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)TNF-a分泌情況；RT-PCR、ELISA法檢測(cè)黃皮葉提取物處理后TNF-a mRNA表達(dá)及分泌情況；根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組：正常組、LPS組

2、、LPS+MyD88抑制劑組、LPS+黃皮葉提取物組、LPS+黃皮葉提取物+MyD88抑制劑組， TLR4/MyD88/TRAF6信號(hào)通路中的相關(guān)炎癥因子通過(guò) RT-PCR、Western Blot法檢測(cè)。
　　結(jié)果：不同濃度黃皮葉提取物(25u、50、100ug/mL)及 LPS（1ng/mL）均對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制；不同濃度LPS(0.1、1、10、100ng/mL)均能誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-a，其中在LPS濃度

3、為1ng/mL的時(shí)候TNF-a分泌最多；以LPS（1ng/mL）在不同時(shí)間（4、8、12、24、48h）刺激RAW264.7細(xì)胞，結(jié)果顯示隨著時(shí)間的增加TNF-a分泌及mRNA表達(dá)增加；黃皮葉提取物能降低炎癥因子（TLR4、MyD88、TRAF6、TNF-a）表達(dá)，且濃度越高抗炎效果越強(qiáng)；通過(guò)分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃皮葉提取物可能主要通過(guò) MyD88依賴途徑抗炎，MyD88抑制劑與黃皮葉提取物協(xié)同抗炎作用。
　　結(jié)論：黃皮葉提取物具有抑