牛奶引起食物不耐受組分鑒定及應(yīng)用研究.pdf

1、目的：食物不耐受逐漸引起了現(xiàn)在臨床醫(yī)生及相關(guān)研究人員的廣泛關(guān)注，若是確定患者機(jī)體內(nèi)的不耐受組分則可以使疾病得到有效的預(yù)防和治療。本文以牛奶為例，分析引起牛奶不耐受的蛋白組分并進(jìn)行初步分離，進(jìn)而用已確定的蛋白組分作為已知抗原，研制雙抗原夾心法測定牛奶特異性抗體的檢測方法以及生物素-鏈霉親和素間接包被法測定牛奶中特異性免疫球蛋白G（IgG）的方法。
　　方法：在本研究中，選取由牛奶引起的不耐受患者血清（抗體）為探針，采用SDS-PAG

2、E和酶免疫印記技術(shù)，分析能與不耐受患者血清相結(jié)合的蛋白區(qū)帶確定為不耐受原。采用選擇沉淀、凝膠過濾等技術(shù)純化以確定不耐受的組分，經(jīng)酶免疫印記和酶聯(lián)免疫實驗確定分離蛋白的免疫活性。雙抗原夾心法分別包被抗原和標(biāo)記抗原，經(jīng)棋盤滴定法確定檢測體系中最佳用量。間接包被法采用生物素標(biāo)記牛血清白蛋白-鏈霉親和素制備酶標(biāo)反應(yīng)板、并用生物素標(biāo)記已知抗原，同時使用酶標(biāo)記抗人IgG作為標(biāo)記抗體；特異性IgG水平經(jīng)雙抗原夾心法獲得的IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。
　

3、　結(jié)果：牛奶中與不耐受血清發(fā)生結(jié)合的組分包括免疫球蛋白（Ig，160kDa）、牛血清白蛋白（BSA，67kDa）酪蛋白（CN，30kDa），同時β乳球蛋白（BLG，17kDa）以及α乳白蛋白（ALA,14kDa）也顯示出與患者血清結(jié)合的反應(yīng)。采用等電點沉淀、凝膠過濾和離子交換層析等技術(shù)可獲得酪蛋白、β乳球蛋白、α乳白蛋白和分子量較大的P1組分（牛血清白蛋白和免疫球蛋白）。
　　雙抗原夾心法可用于牛奶特異性抗體測定，以美國Biome

4、rica酶聯(lián)免疫（間接法）作為參比方法，雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法敏感度為93.3％，特異度為100%，準(zhǔn)確度為96.7%；陽性預(yù)測值為100%，陰性預(yù)測值為93.7%。間接包被模式的食物特異性IgG酶聯(lián)免疫法可應(yīng)用于不耐受患者血清特異性IgG檢測，同樣也以美國Biomerica酶聯(lián)免疫作為參比方法，牛奶特異性IgG測定敏感度為92.1%，特異度為90.0%，準(zhǔn)確度為91.0%。建立的兩種方法均與原有的方法比較符合程度都很高。
　　結(jié)論

5、：
　　1、與食物過敏不同，牛奶中引起食物不耐受的成分是一些大分子蛋白：免疫球蛋白、牛血清白蛋白、酪蛋白等；同時不耐受個體間不耐受成分基本相同，個體間只是抗體效價的不同。
　　2、食物特異性IgG檢測試劑的性能主要決定于所用的已知抗原。每種食物蛋白組分復(fù)雜，對食物蛋白鑒別和初步純化是非常必要的。
　　3、雙抗原夾心法可用于食物不耐受特異性IgG檢測，與間接法相比具有較好的特異性。新型間接包被模式可以用于食物不耐受特異性