褪黑素在體外成熟培養(yǎng)技術(shù)中對人類早期胚胎發(fā)育影響的探究.pdf

1、研究背景：與常規(guī)IVF方案相比，人體外未成熟卵母細(xì)胞成熟技術(shù)（IVM）仍有很大的提升空間。褪黑素作為一種強(qiáng)效廣譜抗氧化劑，可以清除體外培養(yǎng)條件下過多的氧自由基（ROS），從而抑制氧化應(yīng)激對卵母細(xì)胞及胚胎的損傷。褪黑素添加于IVM培養(yǎng)液中是否可以促進(jìn)IVM技術(shù)中未成熟卵母細(xì)胞成熟及發(fā)育潛能，從而作為改進(jìn)IVM技術(shù)方案的突破點(diǎn)？本研究在人胚胎培養(yǎng)液中加入不同濃度褪黑素，探索對IVM技術(shù)中產(chǎn)生的人類早期胚胎的影響，旨在為IVM技術(shù)的改進(jìn)提供理

2、論依據(jù)。
　　方法：從2015年3月到2015年12月，共收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心ICSI治療周期患者未成熟卵母細(xì)胞353枚，患者年齡在35歲以下列入研究對象。人未成熟卵母細(xì)胞在含有10-5褪黑素的 IVM培養(yǎng)液中培養(yǎng)至 MⅡ期，培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞行ICSI后，移至含有五組不同濃度褪黑素（0、10-11、10-9、10-7、10-5M）的胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，觀察胚胎后續(xù)發(fā)育情況。挑選優(yōu)質(zhì)囊胚行array CGH檢

3、測，以評估褪黑素添加于IVM培養(yǎng)液及胚胎培養(yǎng)液，對囊胚安全性的影響。
　　結(jié)果：經(jīng)過24~26 h的體外培養(yǎng)，共獲得290枚成熟卵母細(xì)胞，用于評估褪黑素對胚胎后續(xù)發(fā)育的影響。胚胎卵裂率、優(yōu)質(zhì)囊胚率在五組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。囊胚率在4種褪黑素處理組中與對照組無顯著差異，但是囊胚率在10-9M組最高，在10-5M組最低，10-9M組囊胚率顯著高于10-5M組（47.1％vs14.7%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002,χ2=9.5

4、00）。在GV期和MⅠ期亞組中，卵裂率、囊胚率、優(yōu)質(zhì)囊胚率在不同濃度褪黑素處理的五組間均無顯著差異。GV期亞組中。囊胚率在0M組最高（42.9%），在10-5M組最低（13.6%）；優(yōu)質(zhì)囊胚率在0M組最高（19.0%），在10-5M組最低（4.5%）。在MⅠ期亞組中，囊胚率在10-9M組最高（64.0%），而在10-5M組最低（16.7%）；優(yōu)質(zhì)囊胚率在10-9M組最高（24.0%），而在10-7M組最低（8.0%），本研究中共培養(yǎng)獲得

5、囊胚75枚，優(yōu)質(zhì)囊胚33枚。CGH的檢測結(jié)果為：胚胎培養(yǎng)液褪黑素處理組的非整倍體率（12.5%，2/16）略低于對照組（16.7%，1/6），但是兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：（1）IVM培養(yǎng)液中加入褪黑素的前提下，在胚胎培養(yǎng)液中加入褪黑素，對人類早期胚胎的發(fā)育作用不大，低濃度褪黑素（0、10-11、10-9M）有增加囊胚形成率的傾向,但是高濃度褪黑素（10-7M、10-5M）會不利于胚胎的發(fā)育。（2）褪黑素添加在胚胎培養(yǎng)液中，