抗EGFR治療提高復發(fā)食管癌放療療效的動物模型實驗.pdf

1、背景：
　　在我國，食管癌是高發(fā)惡性腫瘤，發(fā)病率列第三位，死亡率列第四位。食管癌患者確診時，大多已不能通過手術達到根治治療，放化療綜合治療成為食管癌無法手術患者的重要治療辦法。但即使已行放化療，食管癌局部復發(fā)的概率為30-40％。復發(fā)后食管癌的治療成為再程治療的難題，再治療效果差，治療風險大。研究認為是食管癌復發(fā)治療效果不佳的原因可能為：(1)食管組織在已經(jīng)接受較高照射劑量后，再行局部復發(fā)區(qū)域的放療，正常組織耐受性差，放療劑量無法

2、提高；(2)復發(fā)食管癌腫瘤內(nèi)區(qū)域乏氧程度較前增高，對再次放療抵抗程度增加。研究證明，乏氧區(qū)域的腫瘤EGFR基因也出現(xiàn)高表達，所以利用EGFR靶向治療與放療的結合，有可能成為治療復發(fā)性食管癌的有效治療方法。尼妥珠單抗可用來治療EGFR表達陽性腫瘤的分子靶向藥物，目前臨床實驗證實可與放療結合治療食管癌，是目前國際唯一獲批治療食管癌的單抗藥物。
　　目的：
　　通過建立動物食管癌復發(fā)模型，采用尼妥珠單抗加放療對復發(fā)食管癌模型進行治

3、療，觀察抑制腫瘤生長的情況，確定探討抗EGFR治療聯(lián)合放療對于復發(fā)食管癌的療效；應用細胞流式技術，免疫組化技術，Western Blot等技術，探討不同食管癌復發(fā)模型乏氧狀態(tài)和EGFR表達的關系，分析EGFR抑制劑抗腫瘤的作用機制。
　　方法：
　　Western Blot實驗檢測常氧和乏氧培養(yǎng)下加或不加尼妥珠單抗EC109食管鱗癌細胞中EGFR、p-EGFR和HIF-1α的蛋白表達水平。細胞流式技術檢測EC109細胞不同處

4、理方式后的細胞周期和凋亡狀態(tài)。構建兩種食管癌復發(fā)腫瘤模型：(1)裸鼠種植腫瘤前24小時行X線照射種植部位10Gy；(2)常規(guī)建立裸鼠皮下移植瘤后，照射20Gy待腫瘤再生長，并以常規(guī)裸鼠移植瘤模型進行對照。各組裸鼠成瘤并達到入組標準后，每種模型均分為空白對照組、單純放療組、尼妥珠單抗組以及尼妥珠單抗聯(lián)合放療組4種組，觀察測量腫瘤生長曲線。同時采用免疫組化染色分析不同腫瘤模型HIF-1α和EGFR表達情況。采用配對T檢驗，單因素方差分析進行

5、統(tǒng)計分析。P<0.05為認為差異存在統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　Western Blot分析顯示乏氧狀態(tài)下EC109細胞的HIF-1α、EGFR高表達，應用尼妥珠單抗可下調(diào)p-EGFR的表達。流式細胞分析顯示尼妥珠單抗聯(lián)合放療組將細胞主要阻滯在細胞周期G2、細胞凋亡比率最高。腫瘤組織免疫組化染色證實復發(fā)模型腫瘤HIF-1α表達增加，細胞膜上EGFR的表達亦明顯增高。腫瘤生長延遲實驗證實，放射治療均可抑制腫瘤生長，單純尼妥珠

6、單抗治療與空白對照組沒有明顯差異；復發(fā)食管癌腫瘤生長速度與常規(guī)模型相比生長較慢，尼妥珠單抗聯(lián)合放療治療組腫瘤生長明顯延遲，P＜0.05。
　　結論：
　　細胞實驗證實，食管癌細胞乏氧程度增加， EGFR表達程度亦增加，而尼妥珠單抗可下調(diào)p-EGFR表達。對于EGFR高表達的復發(fā)性食管腫瘤，尼妥珠單抗可以提高放射治療敏感性，明顯改善復發(fā)性食管癌的放療療效。本實驗為臨床上復發(fā)食管癌治療提供新思路，為尼妥珠單抗用于提高復發(fā)性食管癌