新生兒遺傳代謝病篩查診治模式建立及篩查疾病基因研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進行新生兒遺傳代謝病篩查模式建立
　　目的:新生兒疾病篩查是公認的最有價值的出生缺陷預(yù)防的第三級預(yù)防措施之一，目前我國新生兒遺傳代謝病普遍篩查的病種僅有2-4種，而能夠致殘的遺傳代謝病病種日益增多至千余種，在目前的體系中通過利用國際最先進的串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立多種氨基酸脂肪酸及有機酸代謝病的篩查方法、截斷值，擴大篩查病種至數(shù)十種，并明確診斷流程，探索這些疾病的治療方法

2、，通過流行病學(xué)研究與基因分析，研究本地區(qū)遺傳代謝病的發(fā)病情況、發(fā)病特點及干預(yù)方式。完善篩查網(wǎng)絡(luò)建立信息化管理，從衛(wèi)生經(jīng)濟學(xué)角度分析該項工作的深刻意義。比較正常新生兒和高危新生兒中發(fā)病率是否存在差異，為篩查病種的增加和遺傳代謝病診治標準的建立提供臨床依據(jù)。
　　方法:自2010年12月至2015年12月，濟南市新生兒疾病篩查中心按照知情同意原則對新生兒采集血樣進行串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查，篩查病種為37種氨基酸、有機酸、脂肪酸代謝病，計算單

3、病種以及分類病種篩查陽性率。同時間段收集臨床高危兒以及可疑遺傳代謝病患兒，通過質(zhì)譜技術(shù)平臺明確診斷，計算確診疾病發(fā)病情況，比較與新生兒篩查樣本疾病譜及發(fā)病情況。
　　結(jié)果:應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)平臺，篩查新生兒61702例，篩查陽性1170例，篩查陽性率1.8％，確診40例陽性患兒。篩查確診總陽性率1∶1542(0.65‰)，其中有機酸代謝病兩種共23例，氨基酸代謝病三種10例，脂肪酸代謝病三種7例。本中心承擔(dān)山東全省以及周邊省份串聯(lián)質(zhì)譜篩

4、查可疑患兒的確診，故接診各地轉(zhuǎn)診初篩陽性患兒較多，另外包括臨床高危兒的篩查，2010年12月至2015年12月共2948例，共診斷氨基酸有機酸脂肪酸等代謝病19種145例，陽性率5％，新生兒篩查質(zhì)譜檢測出各種遺傳代謝病陽性率1∶1500，臨床高危兒中確診各種遺傳代謝病1∶15。篩查新生兒確診最多病種為甲基丙二酸癥，高苯丙氨酸血癥，游離肉堿缺乏癥，3甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥;臨床高危兒確診最多病種為甲基丙二酸血癥，高苯丙氨酸血癥。

5、r>　　結(jié)論:質(zhì)譜技術(shù)用于新生兒遺傳代謝病篩查能夠極大擴展篩查病種，濟南地區(qū)此類遺傳代謝病發(fā)病率較高，有必要進行新生兒期的普便篩查。通過臨床常見發(fā)病病種與篩查陽性病種比較，確定本地域發(fā)病率最高及危害較大的病種為甲基丙二酸血癥、高苯丙氨酸血癥。
　　第二部分 篩查疾病的基因分析
　　目的:針對串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查并確診的陽性病例，建立基因診斷平臺。探索這些疾病的治療方法，通過流行病學(xué)研究與基因分析，研究本地區(qū)遺傳代謝病的發(fā)病情況、

6、發(fā)病特點及干預(yù)方式。
　　方法:經(jīng)過新生兒遺傳代謝病篩查診斷的陽性患兒，通過DNA質(zhì)譜分析進行基因檢測，對臨床確診的先天性甲低，高苯丙氨酸血癥，先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥，以及串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查確診的37種遺傳代謝病患兒留取末梢血樣4滴，采用DNA試劑盒提取干燥血斑中的DNA,用Nanodrop分光亮度計定量。采用Sequenom公司Typer4.0軟件設(shè)計，待測突變位點的PCR擴增引物及單堿基延伸引物，根

7、據(jù)NCBI PubMed、OMIM和HGMD數(shù)據(jù)庫所收錄文獻其公開的基因突變信息納入標準，篩選了常見11種氨基酸代謝異?；?51種突變以及常見23種有機酸代謝異常及脂肪酸氧化代謝異?；?91種突變。
　　結(jié)果:檢測355例先天性甲低患兒，大部分無相關(guān)基因突變，僅一例發(fā)生PAX8基因突變c.155G/C，p.Arg52Pro，且父母雙方未攜帶該突變基因，證實為一代新發(fā)突變。高苯丙氨酸血癥基因檢測140例，其中132例檢測出基因突

8、變位點，并和臨床診斷相符，10例未檢出突變位點，經(jīng)sanger一代測序后7例測出突變位點，其中5個位點為未報道的新發(fā)突變;經(jīng)蛋白分析預(yù)測致病性可疑，可能致病。先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患兒基因檢測70例，10例未測出突變位點，5例查出單雜合一個突變位點，1例患兒有三個突變位點但均來源于父方，這些患兒中其中6例經(jīng)隨訪后排除診斷，其余患兒仍在隨訪中。其余54例均測出來源于父方及母方的兩個突變位點;葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥，檢測35例患兒，6