從HHcy角度探討AD的發(fā)病機理及補腦Ⅰ號干預(yù)作用的臨床及實驗研究.pdf

1、目的：觀察補腦Ⅰ號對心腎虧虛、痰濁阻竅型AD及AD前期并Hcy≥14μmol/l患者的臨床療效及安全性分析。并建立體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細胞受損模型，模擬腦血管高同型半胱氨酸血癥，觀察補腦Ⅰ號含藥血清對體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細胞受損模型的作用。從HHcy角度探討AD的可能發(fā)病機理及補腦Ⅰ號干預(yù)作用。
　　方法：
　　臨床部分:收集該院2013年12月-2016年2月住院或門診心腎虧虛、痰濁阻竅型AD及AD前期

2、并Hcy≥14μmol/l患者，篩選出符合標準的60例隨機分為治療組、對照組，治療組給予補腦Ⅰ號湯劑+常規(guī)西藥（多奈哌齊+葉酸片+維生素B6+維生素B12）治療，對照組給予常規(guī)西藥治療，療程3個月。使用日常生活能力量表(ADL)、MMSE量表及中醫(yī)癥狀評分表評定療效，并檢測受試者血液中NO、ET-1、Hcy、ICAM-1等因子含量，治療前后分別進行安全性評價。
　　實驗部分:出生10天齡昆明種小鼠分離培養(yǎng)獲得原代腦微血管內(nèi)皮細胞;

3、100只2個月齡昆明小鼠，進行補腦Ⅰ號灌胃1次/天，連續(xù)7天后，采取全血，離心，過濾，滅活，獲取正常血清和補腦Ⅰ號含藥血清。通過MTT法篩選出Hcy、補腦Ⅰ號含藥血清最佳干預(yù)濃度和最佳作用時間，進行體外高同型半胱氨酸造模及不同因素干預(yù)。正式實驗分為4組:正常組、模型組、模型組+正常血清組、模型組+補腦Ⅰ號含藥血清組。使用免疫細胞化學方法檢測ICAM-1、bcl-2蛋白表達量，實時熒光定量PCR檢測ICAM-1、NFκBp65、Bax等基

4、因的相對表達量，ELISA檢測細胞上清中NO、ET-1分泌水平。
　　結(jié)果：
　　臨床部分:治療前后比較:兩組ADL評分、Hcy濃度均降低，MMSE評分升高，差異具有統(tǒng)計學意義;治療組中醫(yī)癥狀評分、ET-1、ICAM-1含量降低，NO升高，差異具有統(tǒng)計學意義，對照組差異不具有統(tǒng)計學意義。治療后，與對照組比較，中醫(yī)癥狀評分、ADL評分、ET-1、ICAM-1、Hcy降低，MMSE評分、NO升高，差異具有統(tǒng)計學意義;治療組、對照

5、組MMSE評分有效率分別為89.6％、75.8％，治療組、對照組中醫(yī)癥候評分有效率分別為82.75％、65.5％。安全性分析:治療前后治療組和對照組均無不良反應(yīng)。
　　實驗部分:成功獲得純度較高的腦微血管內(nèi)皮細胞;10mol/L的Hcy干預(yù)24h具有明顯的細胞毒性作用，可抑制腦微血管內(nèi)皮細胞的生長引起細胞損傷，成功模擬體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細胞受損的模型。通過MTT法篩選補腦Ⅰ號含藥血清最佳干預(yù)濃度為10％（體積分數(shù)）及最

6、佳時間作用點為72小時。造模及干預(yù)處理后，與模型組比較模型組+補腦Ⅰ號含藥血清組ICAM-1蛋白表達量、ICAM-1、NFκBp65、Bax基因相對表達量，細胞上清ET-1分泌水平下降，bcl-2蛋白表達量、細胞上清NO分泌水平升高，差異有統(tǒng)計學意義;正常血清+模型組的變化無統(tǒng)計學意義;正常組ICAM-1蛋白表達量，ICAM-1、NFκBp65、Bax基因相對表達量，細胞上清ET-1分泌水平下降，bcl-2蛋白表達量、細胞上清NO分泌水

7、平升高，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.補腦Ⅰ號能夠改善AD或AD前期患者的認知功能障礙，減輕患者臨床癥狀及提高生活質(zhì)量，安全性好，值得更深層次的研究和臨床應(yīng)用;
　　2.補腦Ⅰ號能降低Hcy水平，改善AD癥狀，對AD發(fā)生、發(fā)展具有保護作用，為臨床老年性癡呆藥物治療的開發(fā)提供依據(jù);
　　3.補腦Ⅰ號對高同型半胱氨酸損傷的腦微血管內(nèi)皮細胞具有保護作用，其保護機制可能與，當機體受到高同型半胱氨酸損傷時，補腦Ⅰ