乳腺癌X線斷層征象與Survivin的相關(guān)性研究.pdf

1、背景
　　乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)，乳腺癌的發(fā)病率及死亡率在全球范圍內(nèi)均呈上升趨勢(shì)，每年乳腺癌以大約2％-3%的速度遞增，且發(fā)病年齡逐漸年輕化，嚴(yán)重危害女性的健康，因此，早期發(fā)現(xiàn)及診斷、以及早期的治療對(duì)提高乳腺癌的生存率以及降低其死亡率至關(guān)重要。醫(yī)學(xué)影像學(xué)，在乳腺癌的檢出以及診斷方面，具有重要價(jià)值。目前，應(yīng)用于臨床的影像學(xué)檢查方法有數(shù)字化乳腺X線攝影、超聲檢查、磁共振成像等，影像學(xué)檢查方法的臨床應(yīng)用，使乳腺癌的檢出

2、率與診斷準(zhǔn)確性得到大幅提升。數(shù)字乳腺三維斷層攝影(Digital breast tomography，DBT)應(yīng)運(yùn)而生。數(shù)字乳腺三維斷層攝影作為一種新的技術(shù)，不但有效的避免了傳統(tǒng)全視野數(shù)字乳腺 X線攝影(Full-filled digital mammography，F(xiàn)FDM)因過(guò)度擠壓而造成的受檢者不適感的問(wèn)題，還有效的解決了傳統(tǒng)FFDM圖像中因乳腺組織重疊對(duì)病變的遮蔽的影響[1]，目前，DBT在臨床上得到廣泛的認(rèn)可及應(yīng)用研究。國(guó)內(nèi)外

3、大量研究表明，DBT在發(fā)現(xiàn)疾病、診斷疾病等方面明顯優(yōu)于 FFDM，在展示病變的影像特征及細(xì)節(jié)方面明顯優(yōu)于FFDM。
　　目前，對(duì)腫瘤的病因、發(fā)生以及發(fā)展機(jī)制的探索，已經(jīng)深入到分子生物學(xué)及基因水平。大量研究表明，一些激素受體、癌基因及抑癌基因、細(xì)胞因子等，會(huì)對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響，從而決定腫瘤的生長(zhǎng)方式、形態(tài)特點(diǎn)以及惡性程度、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等。腫瘤的分子生物學(xué)特性決定其組織病理的大體形態(tài)改變，從而決定了醫(yī)學(xué)影像學(xué)的表現(xiàn)。
　　

4、目前，越來(lái)越多的學(xué)者對(duì)miRNA進(jìn)行廣泛、深入的研究，尤其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程方面，以及腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移方面，進(jìn)行深入的、多方面的研究。目前，對(duì)miRNA的研究已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，貫穿于分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)以及遺傳學(xué)等多個(gè)專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域。據(jù)大量的研究推測(cè)，microRNA參與了大約三分之一的人類(lèi)基因編碼的mRNA的負(fù)調(diào)控[2,3]。研究還發(fā)現(xiàn)，miRNAs與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。miRNAs可發(fā)揮癌基因、或抑癌基因的作用，又或

5、同時(shí)具有兩種功能[4]。另有研究表明，miRNAs是早期診斷腫瘤以及判斷腫瘤預(yù)后的重要的分子標(biāo)記，可候選靶標(biāo)進(jìn)行治療干預(yù)，并成為生物醫(yī)學(xué)的重要研究對(duì)象。因此，研究 miRNAs在惡性腫瘤中的表達(dá)，在診斷腫瘤以及判斷腫瘤的預(yù)后方面具有意義重大[5]。
　　MiRNA143位于人類(lèi)染色體5q32，其成熟體序列為5’-UGAGAUGAAGCAC UGUAGCUC-3’。在miRNA143的研究中發(fā)現(xiàn)，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用

6、。研究提示，miRNA143可能直接、或間接靶向轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子，從而發(fā)揮調(diào)控作用，但具體的調(diào)控機(jī)理尚有待于進(jìn)一步的研究。有研究證實(shí)，上調(diào) miRNA143的表達(dá)不僅可抑制宮頸鱗癌的細(xì)胞的增殖活性，同時(shí)，也可影響宮頸鱗癌細(xì)胞增殖周期，并能誘導(dǎo)宮頸鱗癌細(xì)胞的凋亡[6]。另有研究證實(shí)[7,8]， miRNA143及 miRNA145在膀胱癌中呈明顯低表達(dá)，提示，其可能與膀胱癌的發(fā)生關(guān)系密切，而且，miRNA143可抑制細(xì)胞的增殖和遷移[9

7、]。有研究表明[10]，在結(jié)直腸腫瘤組織中 miRNA143的表達(dá)水平，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于癌旁正常組。深入的研究發(fā)現(xiàn)[11]，miRNA143是DNMT基因重要調(diào)控因子，其通過(guò)對(duì)該基因的表達(dá)調(diào)控，最終影響DNA的甲基化水平。這些結(jié)果提示，miRNA143與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。然而，其具體的作用機(jī)制，仍有待進(jìn)一步深入的研究及探討。
　　生存素Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor ofapoptosis protein

8、s，IAPs)中的一員。Survivin只在腫瘤以及胚胎組織中表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)Survivin具有腫瘤特異性，在腫瘤細(xì)胞的分化以及增殖方面、在腫瘤的浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著重要的作用。作為 IAPs最小的一員，Survivin具有其獨(dú)特的生物學(xué)功能以及組織分布。Survivin在抑制細(xì)胞凋亡及促進(jìn)增殖、血管生成中，起著關(guān)鍵作用，并可通過(guò)多種機(jī)制，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。Survivin的表達(dá)，具有高度特異性。生理狀態(tài)下，大多數(shù)組織中幾乎檢

9、測(cè)不到其基因的表達(dá)，只有在胚胎組織中高表達(dá)，而在乳腺癌、食管癌、結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、膀胱癌、肺癌等均有不同程度的表達(dá)[12-18]。有研究表明，在多種腫瘤中，miRNA143與survivin的表達(dá)關(guān)系密切。
　　目的
　　1.探討乳腺癌的X線斷層征象與Survivin表達(dá)的相關(guān)性，以期通過(guò)乳腺癌的 X線斷層征象，間接反映、推測(cè)癌組織中 Survivin的表達(dá)，為通過(guò)乳腺癌 X線斷層征象來(lái)

10、推測(cè)、評(píng)估腫瘤的生物學(xué)特性或反應(yīng)以Survivin為靶點(diǎn)的治療是否有效奠定基礎(chǔ)。
　　2.在前面實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，研究 miRNA143在人乳腺癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D的生長(zhǎng)、增殖以及凋亡的調(diào)控作用和可能的分子機(jī)理，及其在細(xì)胞中低表達(dá)與Survivin基因之間的關(guān)系。
　　材料與方法
　　1.對(duì)82例乳腺癌病人行乳腺X線斷層攝影，包括頭尾位及內(nèi)外側(cè)斜位。檢查后二周內(nèi)，所有的病例均行切除術(shù)，包括全乳或部分乳腺的

11、切除術(shù)。而術(shù)前，均不進(jìn)行任何的抗腫瘤治療，如化療及放療。術(shù)后標(biāo)本采用 westernblot法檢測(cè)腫瘤組織中survivin的表達(dá)。
　　2.合成microRNA143及其對(duì)照microRNA，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞系FCY20210 T47D。采用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染microRNA143及其對(duì)照microRNA后人乳腺癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D的增殖情況，采用流式細(xì)胞術(shù)和caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染人乳腺

12、癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D的凋亡情況，采用western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D的生存素Survivin的表達(dá)情況。采用 siRNA降低 survivin水平，再采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞系FCY20210 T47D，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。
　　3.使用SPSS22.0對(duì)本研究中所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果都表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（X± SD）。采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析（one-way

13、ANOVA）對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。P<0.05表示各組之間的差異具有顯著性。
　　結(jié)果
　　1.82例乳腺癌患者X線圖像，包括直接征象：?jiǎn)渭兡[塊30例（36.59%）、腫塊并鈣化28例（34.15%）、單純鈣化11例（13.41%）、局限致密6例（8.33%）及結(jié)構(gòu)扭曲7例（8.54%）。按有無(wú)腫塊分組：腫塊組58例（70.73%），非腫塊組24例（29.27%）。按腫塊大?。ㄩL(zhǎng)徑）：＜2cm組15例（占腫塊組的25.86%）

14、、2cm≤長(zhǎng)徑≤5cm組24例（占腫塊組的41.38%）、＞5cm組19例（占腫塊組的32.76%）。按腫塊有無(wú)毛刺征：有毛刺組21例（占腫塊組的60.34%）、無(wú)毛刺組23例（占腫塊組的39.66%）。按有無(wú)鈣化：有鈣化組39例（占腫塊組的47.56%）、無(wú)鈣化組43例（占腫塊組的52.44%）。82例乳腺癌組織中結(jié)果顯示如下：①Survivin在單純腫塊（30例）、腫塊并鈣化（28例）、單純鈣化（11例）、局限致密（6例）及結(jié)構(gòu)扭曲

15、（7例）各組間的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯相關(guān)。②Survivin在腫塊組（58例）與非腫塊組（24例）間的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯相關(guān)。③Survivin在長(zhǎng)徑＜2cm組（15例）、2cm~5cm組（24例）及＞5cm組（19例）間的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且隨著腫塊長(zhǎng)徑的增大，Survivin表達(dá)強(qiáng)度越高。④Survivin在有毛刺組（35例）與無(wú)毛刺組（23例）間的表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有毛刺組Survivin的表達(dá)強(qiáng)度高于無(wú)毛刺組。⑤Survi

16、vin在有鈣化組（39例）與無(wú)鈣化組（43例）間的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯相關(guān)。
　　2.在microRNA143作用下，人乳腺癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D中的survivin蛋白的表達(dá)水平明顯下降；當(dāng)轉(zhuǎn)染microRNA143進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞系 FCY20210 T47D，再采用siRNA技術(shù)干擾survivin蛋白的水平，細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象更加顯著。
　　結(jié)論
　　1.乳腺X線斷層攝影能較清晰的顯示乳腺癌的X線影像特征，是

17、乳腺癌較可靠的檢查方法。
　　2.Survivin的表達(dá)與乳腺癌X線斷層征象中的腫塊大小、有無(wú)毛刺相關(guān)，提示Survivin可能對(duì)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)起促進(jìn)作用。
　　3.乳腺癌 X線斷層征象與分子生物學(xué)相結(jié)合有可能提高乳腺癌的浸潤(rùn)的評(píng)估的準(zhǔn)確性。
　　4.乳腺癌X線斷層征象中腫塊大小及有無(wú)毛刺征，可能用于以Survivin為靶點(diǎn)的治療后的乳腺癌的評(píng)價(jià)。
　　5.microRNA143通過(guò)下調(diào)survivin