1,25二羥基維生素D3對(duì)人乳腺癌細(xì)胞Orai1及Orai3表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：運(yùn)用適當(dāng)濃度1,25-二羥基維生素D3（1,25-dihydroxy vitamin D3，1,25-(OH)2D3）、他莫昔芬（Tamoxifen，TAM）分別處理雌激素受體（Estrogen receptor，ER）、維生素D受體（Vitamin D receptor，VDR）不同表達(dá)狀態(tài)的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7（ER+，VDR+）、MDA-MB-231（ER-，VDR-）、MDA-MB-453（ER-，VDR+），檢測(cè)三種細(xì)

2、胞膜鈣離子通道成分Orai1，Orai3表達(dá)變化，分析維生素D對(duì)乳腺癌細(xì)胞Orai1及Orai3表達(dá)的影響，探討由維生素D誘導(dǎo)的對(duì)Orai介導(dǎo)的Ca2+信號(hào)通路與ER受體通路的關(guān)聯(lián)性，活性維生素D對(duì)ER受體及VDR受體不同表達(dá)狀態(tài)下的乳腺癌細(xì)胞促進(jìn)凋亡的作用及可能的機(jī)制。
　　方法：傳代培養(yǎng)ER、VDR不同表達(dá)狀態(tài)的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7（ER+，VDR+）, MDA-MB-231（ER-，VDR-），MDA-MB-453（ER-

3、，VDR+），以1,25-(OH)2D3（1×10-8mol/L）處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的乳腺癌細(xì)胞，同時(shí)用17-β-雌二醇（1×10-9mol/L）和他莫昔芬（1×10-6mol/L）分別處理這三種細(xì)胞作為對(duì)照，于處理后48h時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞，提取RNA及蛋白，采用Real-time RT-PCR法檢測(cè)Orai1和Orai3的mRNA相對(duì)含量，Western Blot檢測(cè)其蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.ER陽性表達(dá)的MCF-

4、7乳腺癌細(xì)胞中Orai3的表達(dá)水平高于ER陰性表達(dá)的MDA-MB-231，MDA-MB-453細(xì)胞（P<0.05）；在ER陽性表達(dá)的MCF-7乳腺癌細(xì)胞中，17-β-雌二醇可以上調(diào)Orai3的表達(dá)，其ER受體拮抗劑TAM則抑制Orai3的表達(dá)（P<0.05）。
　　2.維生素D作用于三種ER、VDR不同狀態(tài)下的乳腺癌細(xì)胞后，Orai3的表達(dá)僅在ER及VDR陽性表達(dá)的MCF-7細(xì)胞中明顯受到抑制（P<0.05），ER及VDR表達(dá)陰性

5、的MDA-MB-231，ER陰性及VDR陽性MDA-MB-453細(xì)胞中未見明顯受抑（P＞0.05）。
　　3.維生素D在VDR陰性表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞中對(duì)Orai1而非Orai3表達(dá)有上調(diào)作用（P<0.05）；在VDR陽性表達(dá)的MCF-7（ER+，VDR+）,MDA-MB-453（ER-，VDR+）細(xì)胞中未見對(duì)Orai1表達(dá)的促進(jìn)或抑制（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.Orai3在ER陽性表達(dá)的MCF-