維藥榅桲提取物對改善胰島素抵抗作用和機理的研究.pdf

1、目的：應用榅桲提取物和3T3-L1前脂肪細胞株，探討3T3-L1脂肪細胞的增殖以及榅桲提取物對改善胰島素抵抗藥理作用和機制。
　　方法：將3T3-L1細胞分組后，對照組加正常培養(yǎng)液，模型組中加入不同濃度的榅桲提取物，分別在24,42,72h,96h時，使用MTT檢測細胞增殖情況；誘導分化后進行葡萄糖消耗量測定且用油紅O染色和TG含量測定來鑒別誘導是否成功；對分化好的細胞進行分組處理，加地塞米松誘導胰島素抵抗，取上清液，以培養(yǎng)基中的

2、葡萄糖消耗量反映胰島素抵抗程度，葡萄糖含量用葡萄糖檢測試劑盒測定；比較正常對照，模型組，陽性藥物組，及榅桲提取物（低，中，高）組，使用葡萄糖測定試劑盒檢測培養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量和FFA含量；使用PCR法檢測GLUT4和IRS的表達。
　　結果：與對照組比較，50μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的生物堿和多糖能明顯抑制細胞增殖，濃度越高，抑制作用越明顯。榅桲總黃酮的抑制率與對照組相比較，作用并不明顯；經過TG含量測定發(fā)

3、現，與對照組相比，成熟的3T3-L1細胞中脂質含量增多，差異具有統計學意義（P<0.01）。結合油紅O染色可以判定前脂肪細胞成功的誘導成成熟的脂肪細胞。通過葡萄糖試劑盒檢測發(fā)現模型組中的葡萄糖的利用率減少，尤其在48h中，可以鑒定胰島素抵抗模型成立。3T3-L1細胞中加入榅桲生物堿和榅桲多糖后，可以明顯改善3T3-L1細胞胰島素抵抗模型的葡萄糖利用率，與對照相比，差異具有統計學意義（P<0.05）。與對照組相比，模型組細胞內的游離脂肪酸

4、明顯高于正常對照組，表明形成胰島素抵抗模型的同時FFA水平也上升。羅格列酮組與模型組相比，其細胞內的FFA水平明顯下降。同時，榅桲有效提取物生物堿和多糖均能夠有效抑制細胞內游離脂肪酸的合成。誘導分化之后的3T3-L1細胞中的脂肪含量明顯提高，差異具有統計學意義（P<0.01）羅格列酮和榅桲提取物生物堿和多糖能夠改善胰島素抵抗細胞內Glut4和IRS-1基因表達。
　　結論：確定了最佳的細胞鋪板密度和榅桲3個提取物對3T3-L1脂肪