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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文桑樹(shù)轉(zhuǎn)景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)的研究姓名:王海朋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師:王洪利2011-06-10桑樹(shù)轉(zhuǎn)景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)的研究 23 以新桑 11 號(hào)組培苗為材料,通過(guò)單因子試驗(yàn),確定了遺傳轉(zhuǎn)化的最佳侵染濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、kan 篩選濃度、cef 抑菌濃度組合,建立了桑樹(shù)葉盤遺傳轉(zhuǎn)化體系。試驗(yàn)表明:菌液侵染濃度以 OD
2、600= 0.3 最佳;感染桑樹(shù)葉盤以 10 min 為宜;共培養(yǎng) 2 d 最有利于轉(zhuǎn)化;以 20 mg/L 的 Kan 進(jìn)行初篩,30 mg/L 的 Kan 進(jìn)行二次篩選,并用 400 mg/L 的Cef 抑菌,既可以獲得較高的再生芽轉(zhuǎn)化頻率,又能得到較好抑菌效果。此轉(zhuǎn)化體系轉(zhuǎn)化效率為 10%。 4 對(duì)轉(zhuǎn)化抗性桑芽進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,電泳圖譜表明 MSBPase 基因已經(jīng)被導(dǎo)入到桑樹(shù)組織中,桑樹(shù)轉(zhuǎn) MSBPase 基因獲得初步成功。
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