極性相關分子Cdc42、Par3、ZO-1在Runx2過表達小鼠成牙本質(zhì)細胞分化過程中的表達.pdf

1、作為合成和分泌牙本質(zhì)基質(zhì)的僅有細胞類型，成牙本質(zhì)細胞是牙齒發(fā)育形成和牙髓損傷修復的重要基礎。成牙本質(zhì)細胞作為一種典型極性化特征明顯的終末分化細胞，經(jīng)歷了從無極性細胞分化為極性化細胞的過程，并伴隨著牙本質(zhì)基質(zhì)的分泌礦化。 Runx2是一類在牙齒發(fā)育過程中一定程度參與調(diào)控某些特異性基質(zhì)蛋白分子轉(zhuǎn)錄的因子。有研究發(fā)現(xiàn)，Runx2在牙胚發(fā)育過程中存在著時空表達的差異性，其不僅參與了成牙本質(zhì)細胞分化，同時很可能在極性化過程中也扮演了重要角色。Rh

2、o蛋白家族的一種小GTP酶Cdc42做為一種細胞極性開關分子，在細胞極性化過程中起著重要作用。細胞連接的形成和極性蛋白復合物的定位是細胞頂?shù)讟O性建立過程中必不可少的步驟，Par3是上述步驟中的重要調(diào)控分子之一，ZO-1作為緊密連接重要的蛋白分子，在細胞極性過程中同樣起到一定的調(diào)控作用。那么，極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在成牙本質(zhì)細胞分化成熟過程中有何作用？Runx2是否參與調(diào)控成牙本質(zhì)細胞極性化的過程呢?本課題采用多種分子生物

3、學方法證實了部分與成牙本質(zhì)細胞極性建立相關的分子的表達以及與Runx2相關的部分極性相關分子的表達，以期進一步探索并了解成牙本質(zhì)細胞的分化發(fā)育過程。
　　1.極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在野生小鼠成牙本質(zhì)細胞分化過程中的表達提取成熟期野生小鼠的牙髓和OLCs細胞的總RNA后，用PCR瓊脂糖凝膠電泳和檢測Cdc42、Par3、ZO-1 mRNA的表達。取出生后3天、2周野生小鼠及出生前13天、15天、18天野生胚胎小鼠的磨

4、牙牙胚石蠟組織切片，用組織免疫熒光檢測Cdc42、Par3、ZO-1在小鼠磨牙牙胚發(fā)育過程中的表達。結(jié)果：PCR凝膠電泳顯示Cdc42、Par3、ZO-1在小鼠牙髓和OLCs細胞的總RNA中均有表達；Cdc42、Par3、ZO-1參與小鼠磨牙牙胚發(fā)育的整個過程，并參與了成牙本質(zhì)細胞的極性化發(fā)生過程。
　　2.極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在轉(zhuǎn)基因小鼠成牙本質(zhì)細胞分化過程中的表達
　　分別取出生后3天、2周及出生前13

5、天、15天、18天同窩小鼠，取鼠尾組織獲取小鼠DNA，采用PCR瓊脂糖電泳篩選鑒定同窩鼠中的基因鼠；分別取不同發(fā)育時期的同窩小鼠野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠的磨牙牙胚組織切片后，用HE染色對比不同發(fā)育階段牙胚間發(fā)育差異和組織免疫熒光檢測Cdc42、Par3、ZO-1在野生型和轉(zhuǎn)基因小鼠磨牙牙胚發(fā)育過程中的時空表達差異；qRT-PCR定量分析極性分子Cdc42、Par3、ZO-1在出生后3日齡、1周齡和2周齡野生鼠和轉(zhuǎn)基因鼠各鼠系的牙胚中的RNA表