腺病毒介導的IL-28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對U14宮頸癌皮下移植瘤小鼠調節(jié)性T細胞的影響及抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：
　　1.構建小鼠U14宮頸癌皮下移植瘤模型，評價腺病毒介導的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對小鼠宮頸癌移植瘤的影響及其抗腫瘤作用的研究。
　　2.應用克隆技術將IL-28B的基因序列構建于真核表達載體上。
　　方法：
　　1.(1)培養(yǎng)小鼠U14宮頸癌細胞及HEK293細胞；(2)利用HEK293細胞對Ad-IL-28B及Ad-EGFP擴增；采用CPE法測定Ad-IL-28B及Ad-EGFP的滴度；(3)建

2、立Babl/C小鼠U14的宮頸癌的腹水模型，抽取腹水進行皮下移植瘤的種植；(4)待移植瘤直徑達3mm應用隨機數(shù)字表對實驗小鼠進行完全隨機分配成5組，包括IL-2、Ad-mIL-28B、3-溴丙酮酸、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B、Ad-EGFP及PBS組，觀察移植瘤的大小變化，并計算其抑瘤率；(5)20天后處死，分離實驗小鼠的脾臟，將各組小鼠的脾臟進行研磨，通過流式細胞術檢測脾臟中的細胞因子CD4+CD25+FoxP3+Tregs的

3、變化情況。
　　2.通過分子克隆技術，構建真核表達蛋白Ppic9k-IL-28B，使其在BMMY培養(yǎng)基中穩(wěn)定表達并優(yōu)化蛋白表達條件。
　　結果：
　　1.腺病毒介導的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對小鼠宮頸癌移植瘤的治療作用。（1）采用CPE法測定Ad-mIL-28B以及Ad-EGFP的滴度均為108PFU/100ul。（2）成功建立了實驗小鼠的腹水模型及皮下移植瘤模型。(3) Ad-mIL-28、IL-2、3-溴丙酮酸

4、、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組處理后的實驗小鼠的脾臟中的CD4+CD25+FoxP3+Tregs在淋巴細胞中所占比例分別為7.66％、5.69%、6.63%、2.64%，三溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組與PBS組相比明顯減少。（4）Ad-mIL-28、IL-2、3-溴丙酮酸、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組的腫瘤抑瘤率分別為59.18±16.89、62.57±16.28、75.28±3.37、79.23±3.82，3-溴丙

5、酮酸+Ad-mIL-28B組小鼠的抑瘤率明顯高于PBS組。
　　2.（1）成功構建了重組質粒Ppic9k-IL-28B。（2）建立了重組質粒Ppic9k-IL-28B的表達方法。
　　結論：
　　1.腺病毒介導的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對Treg細胞因子有下調的作用。腺病毒介導的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對小鼠移植瘤有抑制作用。
　　2.將IL-28B導入Ppic9k表達載體后，畢赤酵母GS115表達菌接受