蛹蟲草CmWC-1、CmWC-2基因的序列分析和藍(lán)光誘導(dǎo)表達(dá).pdf

1、蛹蟲草是一種重要的藥食兩用真菌，富含多種生理活性成分包括蟲草多糖、蟲草素等。而藍(lán)光作為一種能影響真菌光受體的環(huán)境信號(hào)，能調(diào)控多種生物生長(zhǎng)及生理學(xué)過(guò)程。本研究試圖通過(guò)分子生物學(xué)研究進(jìn)一步了解藍(lán)光對(duì)蛹蟲草功能基因表達(dá)的誘導(dǎo)，為挖掘蛹蟲草的功能基因?qū)氋F資源提供支持。本研究得到的主要結(jié)果如下:
　　 (1)通過(guò)3'RACE法得到蛹蟲草潛在藍(lán)光受體基因CmWC-1、CmWC-的3'端部分序列。測(cè)序結(jié)果表明CmWC-1基因3'端部分片段長(zhǎng)度

2、為1020bp，其中394-452bp為內(nèi)含子;CmWC-2基因3'端序列共1009bp，其中288-353bp為內(nèi)含子。
　　 (2)通過(guò)PCR得到CmWC-1、CmWC-2基因開放閱讀框(ORF)序列，全長(zhǎng)分別為2823bp和1575bp。序列分析表明CmWC-1基因ORF翻譯后氨基酸序列長(zhǎng)度為940aa，推測(cè)此蛋白為GATA型鋅指結(jié)合蛋白，包含3個(gè)PAS功能域（一個(gè)特殊類型PAS域又被稱為L(zhǎng)OV域）和一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)功能域。C

3、mWC-2基因ORF翻譯后氨基酸序列長(zhǎng)度為525aa，推測(cè)此蛋白為Cutinasepalindrome-bindingprotein(PBP)蛋白，包含1個(gè)PAS功能域。
　　 (3)根據(jù)已得到CmWC-1、CmWC-2基因ORF序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR得到CmWC-1、CmWC-2基因ORF部分功能域片段，與pEASY-E1ExpressionVector進(jìn)行連接后導(dǎo)入到Trans-T1受體細(xì)胞中。將陽(yáng)性重組子振蕩培養(yǎng)后提取質(zhì)

4、粒，導(dǎo)入到BL21(DE3)受體細(xì)胞中，挑取陽(yáng)性重組子進(jìn)行菌落PCR鑒定和測(cè)序分析，完成CmWC-1、CmWC-2基因ORF部分功能域原核表達(dá)載體的構(gòu)建。CmWC-1基因部分功能域表達(dá)序列從開放閱讀框(ORF)第844個(gè)核苷酸開始表達(dá)，表達(dá)全長(zhǎng)為1266bp，共計(jì)表達(dá)433個(gè)氨基酸;CmWC-2基因部分功能域表達(dá)序列從開放閱讀框(ORF)第286個(gè)核苷酸開始表達(dá)，表達(dá)全長(zhǎng)為636bp，共計(jì)表達(dá)212個(gè)氨基酸。
　　 (4)通過(guò)實(shí)

5、時(shí)熒光定量PCR(Real-TimeQuantitativePCR)對(duì)蛹蟲草潛在藍(lán)光受體基因CmWC-1、CmWC-2基因在藍(lán)光誘導(dǎo)下表達(dá)量變化進(jìn)行研究，結(jié)果表明CmWC-1、CmWC-2基因在有無(wú)藍(lán)光誘導(dǎo)的條件下均有一定量的表達(dá)，其中在黑暗培養(yǎng)條件下，CmWC-1基因相對(duì)表達(dá)量最高，達(dá)到0.44;藍(lán)光誘導(dǎo)條件下，在16h處出現(xiàn)相對(duì)表達(dá)量峰值0.37。與CmWC-1基因不同，CmWC-2基因在藍(lán)光誘導(dǎo)16h時(shí)相對(duì)表達(dá)量達(dá)到峰值3.28，