FZD2調(diào)控肝細(xì)胞癌擬態(tài)血管形成和腫瘤干細(xì)胞特性的初步研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，新型治療方法逐步增多，但根治性手術(shù)和肝移植仍是主要治療手段，其高復(fù)發(fā)率和高死亡率仍然為得到明顯改善。卷曲蛋白2（frizzled2，F(xiàn)ZD2）是一種新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)分子，它高表達(dá)于多種惡性腫瘤，參與調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)行為，影響腫瘤患者的預(yù)后，有望成為肝細(xì)胞癌的治療靶點。本文旨在探究FZD2與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、擬態(tài)血管形成(va

2、sculogenic mimicry，VM)以及腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)特性三方面的關(guān)系，將有助于闡明肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機制，為患者的早期診斷、靶向治療以及預(yù)后改善研究提供理論基礎(chǔ)。
　　1、FZD2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
　　我們采用熒光定量PCR和免疫組化染色分別從基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測100例肝細(xì)胞癌患者癌組織和癌旁組織FZD2的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其在癌組織的表達(dá)量顯著高于

3、癌旁組織(P＜0.05);統(tǒng)計學(xué)分析表明，F(xiàn)ZD2表達(dá)量與腫瘤大小、病理分化程度、微癌栓、TNM分期、BCLC分期、轉(zhuǎn)移以及早期復(fù)發(fā)等多種病理參數(shù)有關(guān)(P＜0.05);生存分析顯示，F(xiàn)ZD2高表達(dá)的患者術(shù)后無瘤生存時間和總生存時間明顯縮短（P＜0.05），提示FZD2可能是肝細(xì)胞癌潛在的預(yù)后指標(biāo)。
　　2、FZD2調(diào)控肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力
　　為了探究FZD2在肝細(xì)胞癌中的促癌作用，我們分別構(gòu)建siRNA瞬轉(zhuǎn)FZD

4、2低表達(dá)肝癌細(xì)胞模型和慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)FZD2過表達(dá)細(xì)胞模型，采用CCK-8法、平板克隆形成法、流式細(xì)胞儀、Transwell法以及Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，敲低FZD2表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲能力以及EMT進(jìn)程，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，而過表達(dá)FZD2則促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移侵襲以及EMT特性;采用FZD2低表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型證實，F(xiàn)ZD2也可以調(diào)控肝癌細(xì)胞體內(nèi)增殖能力和EMT進(jìn)程。
　　3、FZD2調(diào)控肝細(xì)胞癌

5、的VM形成能力
　　VM是肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的危險因素，其與FZD2的關(guān)系尚未明確。我們采用CD34/PAS雙染法觀察肝細(xì)胞癌和裸鼠移植瘤組織VM的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)FZD2與VM表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05);細(xì)胞三維培養(yǎng)條件下，敲低FZD2抑制肝癌細(xì)胞的成管能力，而過表達(dá)FZD2則增強這種能力，提示FZD2介導(dǎo)肝細(xì)胞癌VM形成。
　　4、FZD2調(diào)控肝癌細(xì)胞的CSCs特性
　　除VM外，CSCs特性也與肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切

6、相關(guān)。流式細(xì)胞儀檢測到，敲低FZD2表達(dá)后肝癌細(xì)胞干細(xì)胞亞群CD44(+)細(xì)胞減少(P＜0.05)，Western blot和免疫組化染色進(jìn)一步證明，肝癌細(xì)胞和移植瘤組織中CSCs轉(zhuǎn)錄因子Nanog和SOX2表達(dá)下調(diào)，而過表達(dá)FZD2上調(diào)肝癌細(xì)胞上述干細(xì)胞表型。因此，F(xiàn)ZD2參與調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞CSCs特性。
　　結(jié)論:
　　FZD2可能通過調(diào)控EMT、VM以及CSCs特性促進(jìn)肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，有望成為肝細(xì)胞癌新的預(yù)測指標(biāo)和治