水飛薊素和富硒蛹蟲草對雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在評價水飛薊素和富硒蛹蟲草對雷公藤甲素致大鼠急性肝損傷的防治效果以及闡明兩者的作用機制。
　　方法:
　　1.水飛薊素對雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護作用研究:使用雄性Wistar大鼠60只，隨機分為5組，即正常組，雷公藤甲素造模組，水飛薊素高、中、低劑量給藥組(200、100、50 mg/kg)，正常組與模型組灌胃給予生理鹽水七天，第八天分別腹腔注射生理鹽水和雷公藤甲素(2mg/kg)。水飛薊素給藥

2、組分別灌胃給予高、中、低劑量的水飛薊素七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模結(jié)束24小時后對所有實驗動物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大動脈血，用于檢測血清轉(zhuǎn)氨酶和總膽固醇含量。放血至死后立即采集肝臟組織，一部分經(jīng)甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫組化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成勻漿液用于檢測抗氧化酶活力、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物、炎癥因子以及細胞色素C含量，一部分提取蛋白后檢測磷酸化JNK、磷酸化p38

3、、活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表達水平。
　　2.富硒蛹蟲草對雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護作用研究:使用雄性Wistar大鼠84只，隨機分為7組，即正常組，雷公藤甲素造模組，富硒蛹蟲草對照組(1.5g/kg)，水飛薊素陽性對照給藥組(200 mg/kg)，富硒蛹蟲草低劑量給藥組(0.75g/kg)，富硒蛹蟲草高劑量給藥組（1.5g/kg），普通蛹蟲草給藥組(1.5g/kg)。正常組與模型組灌胃給予生理鹽水七天，第八天分

4、別腹腔注射生理鹽水和雷公藤甲素（2mg/kg）。富硒蛹蟲草對照組灌胃給予1.5g/kg富硒蛹蟲草七天，第八天腹腔注射生理鹽水。水飛薊素給藥組、高劑量和低劑量富硒蛹蟲草給藥組以及普通蛹蟲草給藥組分別灌胃給予200mg/kg水飛薊素、1.5g/kg和0.75g/kg富硒蛹蟲草以及1.5g/kg普通蛹蟲草七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模結(jié)束24小時后對所有實驗動物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大動脈血，用于檢

5、測血清轉(zhuǎn)氨酶和總膽固醇含量。放血至死后立即采集肝臟組織，一部分經(jīng)甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫組化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成勻漿液用于檢測抗氧化酶活力、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物以及細胞色素C含量，一部分提取蛋白后檢測活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表達水平，一部分提取RNA后檢測NQO1、HO-1和GCLC mRNA表達水平。最后采用石墨爐原子吸收光譜法檢測富硒蛹蟲草和普通蛹蟲草中硒含量、高效液相聯(lián)用質(zhì)譜檢測蟲草素和硒

6、代氨基酸的含量。
　　結(jié)果:
　　1.水飛薊素能夠顯著下調(diào)由雷公藤甲素造成的血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和總膽固醇含量增高，并且能夠顯著改善雷公藤甲素造成的肝臟組織結(jié)構(gòu)變形、細胞壞死和炎性浸潤的現(xiàn)象。另外，水飛薊素能夠顯著恢復(fù)雷公藤甲素造成的抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力下降和抑制MDA以及炎癥因子(IL-6，IL-10、IL-1β、TNF-α)以及細胞色素C含量增高。水飛薊素能

7、夠有效抑制磷酸化p38和磷酸化JNK蛋白、凋亡蛋白活化的caspase-3以及Bax的過表達，但不能提高Nrf2蛋白的表達。
　　2.富硒蛹蟲草能夠顯著下調(diào)由雷公藤甲素造成的血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和總膽固醇含量增高，明顯改善肝組織病理學(xué)畸變，增加細胞內(nèi)抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力，減少MDA的堆積，并且能夠上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平，抑制細胞色素C的釋放、凋亡蛋白Bax

8、以及活化的caspase-3蛋白的過表達從而降低細胞凋亡指數(shù)。另外富硒蛹蟲草能夠激活Nrf2蛋白來調(diào)控GCLC、HO-1和NQO1 mRNA的表達。
　　3.富硒蛹蟲草中的硒、蟲草素和硒代胱氨酸的含量均顯著高于普通蛹蟲草組。
　　結(jié)論:
　　水飛薊素和富硒蛹蟲草都能夠顯著增強體內(nèi)抗氧化防御體系，控制氧化應(yīng)激壓力，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)來預(yù)防雷公藤甲素造成的肝細胞凋亡和肝功能失調(diào)，兩者的作用效果與劑量呈明顯的正相關(guān)性，其中高