右歸丸調控FNDC5缺失小鼠骨-脂代謝的初步研究.pdf

1、目的:
　　構建FNDC5缺失模型，明確FNDC5缺失對骨-脂代謝的影響，探討補腎方劑右歸丸上調FNDC5改善骨-脂代謝的作用和機制。
　　方法:
　　1、采用Talen技術構建FNDC5基因缺失模型，通過提取DNA、PCR擴增、基因測序等方法，確定模型的構建是否成功，并通過熒光定量PCR檢測肌肉中FNDC5的表達;
　　2、將構建成功的小鼠模型進行分組，分為野生組、FNDC5缺失組、右歸丸+FNDC5缺失組，每

2、組8只，雌雄各半。右歸丸組按16.65g/kg每日灌胃，灌胃4周，野生組、FNDC5缺失組每日灌胃生理鹽水。4周后2％水合氯醛麻醉后取材;
　　3、各組小鼠血清進行Irisin的ELISA檢測;
　　4、右歸丸對FNDC5缺失小鼠脂代謝的作用:對各組小鼠稱重，檢測血中甘油三酯(TG)含量，提取皮下脂肪RNA，RT-qPCR檢測FNDC5、PGC-1α、UCP1 mRNA的表達，免疫熒光檢測脂肪UCP1蛋白的表達;
　　

3、5、右歸丸對FNDC5缺失小鼠骨代謝的作用:血清堿性磷酸酶(ALP)活力分析;micro-CT檢測各組小鼠骨密度和骨微細結構，HE染色觀察各組小鼠形態(tài)學變化，提取股骨RNA，Real-time PCR檢測FNDC5、Runx2 mRNA的表達。
　　結果:
　　1、成功構建FNDC5缺失模型，肌肉中FNDC5 mRNA表達量明顯降低（P＜0.01)。
　　2、各組小鼠血清進行Irisin的ELISA檢測結果:與野生組比

4、較，FNDC5基因缺失小鼠的血中Irisin蛋白含量明顯降低（P＜0.01);與FNDC5缺失組比較，右歸丸組血中Irisin蛋白含量顯著升高(P＜0.01)。
　　3、右歸丸對FNDC5缺失小鼠脂代謝的作用:
　　(1)與野生組比較，FNDC5缺失組在各時間點的體重無明顯差異。右歸丸組從第4周開始干預，與FNDC5缺失組比較，雌性小鼠中，右歸丸組從藥物干預開始體重明顯降低，在第5周，體重雖無統計學差異但有下降趨勢;第6、7

5、、8周，體重較FNDC5缺失組顯著降低，且具有統計學差異（P＜0.01）;雄性小鼠中，右歸丸組從藥物干預開始體重較FNDC5缺失組雖無統計學差異，但有降低的趨勢;
　　(2)與野生組比較，雌、雄小鼠FNDC5缺失組血清中TG含量明顯升高（P＜0.01）;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組血清中TG含量顯著降低（P＜0.01）;
　　(3)與野生組比較，FNDC5缺失組雌、雄小鼠皮下脂肪中FNDC5mRNA的表達均明顯降低（P＜

6、0.05)，PGC-1α和UCP1 mRNA的表達均顯著升高（P＜0.05和P＜0.01）;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組雌、雄小鼠FNDC5的表達顯著升高(P＜0.05)。在雌性小鼠中，右歸丸組UCP1的表達明顯高于FNDC5缺失組(P＜0.01);在雄性小鼠中，右歸丸組UCP1的表達同樣顯著高于FNDC5缺失組(P＜0.05)。而右歸丸組雌、雄小鼠PGC-1α的表達與FNDC5缺失組相比，無統計學差異;
　　(4)在免疫熒光

7、中，野生組UCP1表達熒光較弱，且脂肪細胞數量較少，脂滴較大;與野生組比較，FNDC5缺失組UCP1熒光表達明顯增強，且脂肪細胞數明顯增多，脂滴較小;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組UCP1表達增多，脂肪細胞密集，脂滴較小。
　　4、右歸丸對FNDC5缺失小鼠骨代謝的作用:
　　(1)與野生組比較，雌、雄小鼠FNDC5缺失組血中ALP活力明顯降低（P＜0.01）;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組血清中ALP活力明顯升高;

8、r>　　(2)在雌性小鼠中，與野生組比較，FNDC5缺失組tBMD、TbBMD、Tb.Th均明顯降低(P＜0.01)，Tb.Sp明顯升高(P＜0.01)。與FNDC5缺失組比較，右歸丸組tBMD、TbBMD、Tb.Th均明顯升高(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.05)，Tb.Sp明顯降低(P＜0.01);在雄性小鼠中，與野生組比較，FNDC5缺失組tBMD，Tb.Sp未見明顯差異，TbBMD、Tb.Th雖無統計學差異，但有下降的趨勢

9、;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組Tb.Sp無統計學差異;tBMD，TbBMD、Tb.Th雖無統計學差異，但有上升趨勢。
　　(3)HE染色結果可知，野生組可見骨小梁結構完整、致密，骨小梁周圍骨細胞分布均勻;在雌性小鼠中，與野生組比較，FNDC5缺失組可見骨小梁數量明顯減少、稀疏，骨小梁斷裂，排列紊亂、不連續(xù)，骨小梁間距明顯增寬，形成空洞;骨細胞數量明顯減少;與FNDC5缺失組比較，雌性小鼠右歸丸組骨小梁排列明顯整齊，結構完整，骨

10、細胞明顯增多，但與野生組比較仍可見骨小梁裂痕。在雄性小鼠中，與野生組比較，FNDC5缺失組偶見骨小梁斷裂，排列較稀疏，骨小梁周圍骨細胞減少;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組骨小梁排列緊密，結構完整，骨細胞數量增加。
　　(4)在雌性小鼠中，與野生組比較，FNDC5缺失組FNDC5與Runx2 mRNA的表達明顯降低（P＜0.01）;與FNDC5缺失組比較，右歸丸組FNDC5與Runx2 mRNA的表達明顯升高（P＜0.05和P＜0