血清白蛋白與小分子相互作用的熒光光譜法研究.pdf

1、分子間的相互作用因其在生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等眾多領(lǐng)域的廣泛需要和重要作用而受到關(guān)注。由于蛋白質(zhì)在人體內(nèi)的重要功能和地位，基于蛋白質(zhì)為受體的分子間相互作用成為近年來相互作用研究的焦點(diǎn)。許多相互作用分析的研究都從血清白蛋白分子入手，因?yàn)檠灏椎鞍资且环N內(nèi)源性熒光大分子，用熒光光譜法可以簡便、快速、靈敏、直觀地反映出它與其它物質(zhì)之間的相互作用情況，所以，熒光光譜法成為人們研究血清白蛋白與其它物質(zhì)相互作用的主要手段。 論文以牛血

2、清白蛋白為例，對血清白蛋白與其它物質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行了系統(tǒng)的熒光光譜法研究。主要的內(nèi)容和結(jié)果概括如下： 從理論上推斷，以血清白蛋白為檢測對象的傳統(tǒng)熒光光譜法存在方法上的缺陷和不足。傳統(tǒng)熒光光譜方法將血清白蛋白大分子中幾個色氨酸殘基的熒光信號當(dāng)作了整體分子性質(zhì)的反映，影響了相互作用信息的真實(shí)性和完整性。 通過理論上的分析，提出了以具有熒光性質(zhì)的小分子配體為檢測對象的改進(jìn)熒光光譜法。與傳統(tǒng)的方法相比，改進(jìn)熒光光譜法更能全面

3、真實(shí)地反映相互作用的信息。 針對相互作用研究中的熒光光譜重疊現(xiàn)象，提出了“熒光背景扣除法”。該方法有效解決了相互作用體系中兩種物質(zhì)光譜重疊的問題。拓展了熒光光譜法進(jìn)行相互作用研究的對象和范圍。 以十二烷基苯磺酸鈉、伯氨喹、苯海索、曲拉通X-100、西布曲明、西酞普蘭等小分子化合物為配體，采用傳統(tǒng)熒光光譜法、改進(jìn)熒光光譜法以及熒光背景扣除法研究了其與牛血清白蛋白的相互作用。所得結(jié)果與本研究在理論上的推斷一致，證明了傳統(tǒng)方法

4、的不足，證明了改進(jìn)熒光光譜法和熒光背景扣除法的可靠性。 從理論上將適用于熒光光譜法研究的相互作用體系歸納為四種類型體系： a．色氨酸殘基的熒光信號可以表達(dá)整個蛋白分子的性質(zhì)及變化，即配體只作用于色氨酸殘基或只影響色氨酸殘基的微環(huán)境，無論以蛋白大分子或配體小分子為熒光檢測對象得到的結(jié)合常數(shù)無明顯差異； b．色氨酸殘基的熒光信號不能表達(dá)整個蛋白分子的性質(zhì)及變化，即配體不僅僅作用于色氨酸殘基或只影響色氨酸殘基的微環(huán)境，

5、用具有熒光的小分子配體可以直接獲得其被蛋白分子猝滅熒光的譜圖和數(shù)據(jù)；c．色氨酸殘基的熒光信號不能表達(dá)整個蛋白分子的性質(zhì)及變化，且配體的熒光受到蛋白熒光的強(qiáng)烈干擾，采用“熒光背景扣除法”對譜圖進(jìn)行優(yōu)化后可以獲得有效的熒光猝滅譜圖； d．色氨酸殘基的熒光信號不能表達(dá)整個蛋白分子的性質(zhì)及變化，且配體的熒光受到蛋白熒光的強(qiáng)烈干擾，如果采用“熒光背景扣除法”對譜圖進(jìn)行優(yōu)化后仍然不能獲得有效的熒光猝滅譜圖，這類體系不適用于采用熒光方法進(jìn)行研