加味半夏瀉心湯對2型糖尿病大鼠胰腺PERK-CHOP凋亡通路的影響.pdf

1、目的:
　　通過觀察加味半夏瀉心湯對2型糖尿病大鼠血糖、血脂、胰島素抵抗指數(shù)等相關(guān)指標的影響，評價加味半夏瀉心湯的降糖療效，根據(jù)大鼠胰腺PERK-CHOP凋亡通路中相關(guān)蛋白的表達情況，進一步探討加味半夏瀉心湯治療2型糖尿病的機制以及作用靶點，為臨床更好的運用該方提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、80只SPF級(140g±20)雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。按體重隨機分組，空白組作對照，喂養(yǎng)普通飼料10周。剩余

2、大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)10周后，采用低劑量STZ腹腔注射建立T2DM模型，11.1mmol·L-1≤FBG≤33.3mmol·L-1并伴有多飲多食多尿消瘦癥狀為2型糖尿病大鼠，造模成功大鼠隨機分為3組，分別為模型組、加味半夏瀉心湯組、二甲雙胍組。實驗共4組大鼠，每組20只。加味半夏瀉心湯組:予20g·kg-1·d給藥;二甲雙胍組:予鹽酸二甲雙胍200mg·kg1.d灌胃;模型對照組和空白對照組予等體積蒸餾水灌胃。灌胃5周。
　　

3、2、灌胃期間每周同一時間測1次大鼠的空腹血糖并稱重記錄，第5周采用2％戊巴比妥鈉腹腔麻醉，腹主動脈采血，檢測血清中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、游離脂肪酸(FFA)水平，計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)、胰島β細胞功能指數(shù)(HOMA-β)，冰上快速無菌取出胰尾組織液氮中保存，每組另取6只大鼠胰尾置4％多聚甲醛中固定保存。采用Western blot

4、和免疫組化檢測各組大鼠胰腺組織的PERK、P-PERK、GRP78、ATF4、CHOP表達和蛋白含量。用TUNEL法檢測胰腺組織細胞凋亡數(shù)量。采用SPSS22.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((x)±S）表示，所有均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。
　　成果:
　　1、動物一般狀態(tài):與正常組比較，模型組多飲多尿多食消瘦癥狀明顯，脫毛，毛色晦暗無光澤，大便干結(jié)量少，偶有稀溏，會陰部易

5、感染;加味半夏瀉心湯組、二甲雙胍組大鼠飲水、進食量較模型組減少，消瘦及脫毛現(xiàn)象減輕，毛色光澤度有所改善，加味半夏瀉心湯組大鼠大便性狀較模型組溏結(jié)不調(diào)現(xiàn)象改善，二甲雙胍組大鼠大便較模型組量多，質(zhì)偏軟，偶有稀溏。
　　2、對體重的影響:治療前糖尿病各組大鼠體重均低于正常組(P＜0.05)。治療后，與正常組相比，模型組體重明顯下降(P＜0.01);與模型組相比，二甲雙胍組和加味半夏瀉心湯組體重均上升，且有顯著性差異(P＜0.05)。

6、r>　　3、對血糖、空腹胰島素及HOMA-IR、HOMA-β、ISI的影響:造模1周后，與正常組相比，各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR顯著升高，ISI、HOMA-β下降，差異具有顯著性(P＜0.01)。實驗?zāi)c正常組相比，糖尿病各組大鼠FINS下降(P＜0.05)，模型組HOMA-β下降（P＜0.01）;與模型組相比，二甲雙胍組、加味半夏瀉心湯組FBG值下降，F(xiàn)INS、HOMA-β上升，具有顯著性差異(P＜0.05)。二甲雙胍

7、組與加味半夏瀉心湯組HOMA-IR與治療前相比明顯下降，ISI升高，具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　4、對血脂的影響:與正常組相比，模型組大鼠血清TG、TC、LDL-C、FFA水平明顯上升(P＜0.01)、HDL-C明顯下降(P＜0.01)。與模型組比較，二甲雙胍組和加味半夏瀉心湯組TG、TC、LDL-C、FFA水平下降(P＜0.05)、HDL-C水平升高(P＜0.05)。
　　5、PERK、P-PERK蛋白的表達水平

8、:PERK蛋白各組表達水平無統(tǒng)計學(xué)意義。與正常組相比，模型組P-PERK蛋白表達顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，二甲雙胍組與加味半夏瀉心湯組表達水平下降(P＜0.01)。與正常組相比，模型組P-PERK/PERK顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，二甲雙胍組與加味半夏瀉心湯組均下降(P＜0.01)。
　　6、GRP78、ATF4、CHOP蛋白的表達水平:與正常組相比，模型組GRP78、ATF4、CHOP表達水平顯著升高

9、(P＜0.01);與模型組相比，二甲雙胍組與加味半夏瀉心湯組GRP78、ATF4、CHOP表達降低(P＜0.01)。
　　7、胰島細胞凋亡:與正常組相比，模型組胰島細胞凋亡數(shù)量顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，二甲雙胍組與加味半夏瀉心湯組胰島細胞凋亡數(shù)量下降(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激存在于高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠模型中。
　　2.加味半夏瀉心湯可以改善2型