吲哚胺2,3-雙加氧酶在胰腺癌中的表達(dá)及其相關(guān)聯(lián)合免疫治療的效果研究.pdf

1、目的:胰腺癌惡性程度高，診斷困難，在目前中國惡性腫瘤致死率中排名第九，臨床表現(xiàn)為快速的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。外科手術(shù)依然是胰腺癌的治療標(biāo)準(zhǔn)，但多數(shù)患者在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)因為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和局部晚期腫瘤而成為手術(shù)禁忌。胰腺癌患者的五年生存率不足5％，即使經(jīng)過根治性手術(shù)切除以后的患者，其五年生存率仍不足20％。腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制是腫瘤生長，轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，甚至可以誘導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸。吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)是色氨酸經(jīng)犬尿氨酸途徑代謝的限速酶，具有免疫

2、抑制效應(yīng)，在多種腫瘤中表達(dá)并與預(yù)后相關(guān)。其在胰腺癌中的表達(dá)和作用目前仍沒有報道。為研究IDO在胰腺癌中的預(yù)后意義以及可能的免疫治療潛能，我們利用臨床研究和基礎(chǔ)實驗相結(jié)合的方法分析IDO在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用和IDO相關(guān)免疫治療的效果。
　　方法:(1)采用Western Blot法和免疫組織化學(xué)法檢測胰腺癌組織中的IDO表達(dá)量，并進(jìn)一步分析IDO及臨床數(shù)據(jù)與胰腺癌患者術(shù)后生存率的關(guān)系。(2)采用Real time PCR法和We

3、stern Blot法檢測胰腺癌細(xì)胞系的IDO表達(dá)量和IFN-γ的調(diào)控作用，并分析體外條件下DO抑制劑和AHR抑制劑的對胰腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性作用，為進(jìn)一步體內(nèi)動物實驗奠定基礎(chǔ)。(3)使用免疫健全小鼠構(gòu)建皮下種植瘤模型，使用IDO抑制劑1-MT并聯(lián)合免疫佐劑R848聯(lián)合應(yīng)用，觀察其對胰腺癌的治療效果，并使用流式細(xì)胞術(shù)分析腫瘤中免疫細(xì)胞數(shù)量。(4)使用抗體刪除動物體內(nèi)CD8+T細(xì)胞，并使用AHR抑制劑阻斷AHR信號通路功能，觀察各組腫瘤生

4、長情況，評價其效果。分析1-MT聯(lián)合R848治療過程中腫瘤引流淋巴結(jié)中DC細(xì)胞的變化情況。
　　結(jié)果:(1)IDO在胰腺癌中有表達(dá)，與腫瘤分化程度(P=0.017)，TNM分期(P=0.03)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(P=0.04)相關(guān)，而與年齡(P=0.87)，性別(P=0.89)，腫瘤大小(P=0.95)，腫瘤位置(P=0.08)無關(guān)。并且胰腺癌組織中IDO的表達(dá)量(HR=2.38P=0.02)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(HR=2.86P=0.

5、01)與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)，可以作為評價胰腺癌預(yù)后的獨立指標(biāo)。(2)IDO在胰腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)，并且IFN-γ能夠明顯上調(diào)IDO的表達(dá)量;同時進(jìn)行了1-MT、CH223191、R848的體外細(xì)胞毒性實驗，三種藥物在體外條件下對細(xì)胞增殖無明顯影響，可以用于胰腺癌動物模型免疫治療相關(guān)實驗。(3)建立胰腺癌皮下種植瘤模型，觀察1-MT聯(lián)合R848治療胰腺癌效果，結(jié)果顯示1-MT聯(lián)合R848治療組有較好的抑制腫瘤生長的效果，而單獨使用同樣劑量

6、的1-MT和R848并不能很好的控制腫瘤的生長，進(jìn)一步分析腫瘤中的免疫細(xì)胞，1-MT聯(lián)合R848治療組與對照組和R848組相比較，腫瘤中CD8+T細(xì)胞數(shù)目明顯升高。(4)1-MT和R848聯(lián)合治療組cDC細(xì)胞數(shù)目明顯升高;CD8+T細(xì)胞刪除組和CH223191+R848組，并不能抑制腫瘤生長。
　　結(jié)論:胰腺癌組織中IDO的表達(dá)量與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)，并且IDO可以作為評價胰腺癌預(yù)后的獨立指標(biāo);IDO在胰腺癌中的表達(dá)量受IFN-γ