阿侖磷酸鈉和骨碎補對骨質疏松大鼠骨愈合的影響及骨碎補巴布膏研制.pdf

1、目的:
　　研究骨碎補總酮、阿侖膦酸鈉及骨碎補總酮阿侖膦酸鈉二者合用對維甲酸所致的雌性SD大鼠骨質疏松性骨折的骨折愈合及骨生物力學的影響;以及對骨碎補總酮巴布膏進行初步的研制。
　　方法:
　?。ㄒ唬⒐撬檠a總酮對雌性SD大鼠骨質疏松性骨折愈合及骨生物力學影響的
　　實驗研究
　　40只雌性SD大鼠被隨機分成2組，對照組5只用相同容量的生理鹽水灌胃，骨質疏松組35只運用維甲酸濃度為80mg.kg-1.d-1

2、灌胃制造雌性SD大鼠實驗性骨質疏松模型，連續(xù)灌胃15天后，骨質疏松組隨機選擇5只與對照組5只一起行骨密度檢查確認骨質疏松造膜成功后，將剩余30只大鼠按隨機原則被分成2組，每組各15只。麻醉后，消毒鋪巾，切開暴露右側股骨，將右股骨截骨造成橫行骨折，同時用φ1.0mm克氏針行股骨髓內固定，二組大鼠分別在術后第2日開始給予灌胃，對照組:生理鹽水8ml.kg-1.d-1，骨碎補總酮組:90mg.kg-1.d-1，分別在骨折髓內固定術后2周、4周

3、和6周每組各選5只試驗大鼠麻醉后用頸椎脫位法處死并行x線檢查和骨痂測量，同時取大鼠右側股骨骨痂標本行組織學檢查以了解骨碎補總酮對實驗性骨質疏松性大鼠骨折愈合的影響，另取大鼠左側股骨全長標本給予生物力學測試以了解骨碎補總酮對實驗性骨質疏松性大鼠的骨生物力學影響。
　?。ǘ?、阿侖膦酸鈉和骨碎補總酮對SD大鼠骨質疏松性骨折愈合及骨生物力學影響的試驗研究
　　70只雌性SD大鼠根據(jù)隨機原則被分成2組，對照組5只用2ml/d的生理鹽

4、水灌胃，骨質疏松組65只大鼠用維甲酸濃度為80mg.kg-1.d-1灌胃制造雌性SD大鼠實驗性骨質疏松模型。在連續(xù)灌胃15天后，骨質疏松組隨機選擇5只與對照組5只一起行小動物骨密度儀檢查骨密度，確認骨質疏松造膜成功后，將剩余65只大鼠按隨機原則被分成4組，每組各15只。用水合氯醛腹腔注射加利多卡因麻醉后，剃毛局部切開，暴露右側股骨中上段，將右股骨骨折截骨造成橫行骨折，同時用φ1.0mm克氏針行髓內固定，術后給予換藥和注射抗生素3天預防感

5、染，并分別在術后第二日開始給予灌胃，阿侖膦酸鈉組:阿侖膦酸鈉組40mg/kg.w;骨碎補總酮組:骨碎補總酮90mg/kg.d;二者合用組:阿侖膦酸鈉組40mg/kg.w和骨碎補總酮90mg/kg.d;對照組:生理鹽水8ml/kg.w灌胃。分別在骨折內固定術后2周，4周，6周從每組中隨機抽取5只，水合氯醛麻醉頸椎脫位法處死大鼠后行X線檢查、PACS系統(tǒng)X線骨痂測量及取右側股骨骨痂標本行組織學檢查來評估阿侖膦酸鈉，骨碎補總酮及二者合用對維甲

6、酸酸所致的雌性SD大鼠骨質疏松性骨折骨愈合過程的影響;另取左側股骨全長給予生物力學測試以了解阿侖膦酸鈉、骨碎補總酮以及二者合用對維甲酸酸所致的雌性SD大鼠骨質疏松骨的生物力學性能影響。
　?。ㄈ?、骨碎補總酮巴布膏的研制
　　提取骨碎補總酮，以阿拉伯膠、西黃耆膠、甘油、壓敏膠、氧化鋅按2.0∶2.0∶4.0∶0.6∶0.1的最佳配比做成巴布膏基質，并加入透皮促進劑:以氮酮與丙二醇共同作為促透劑，且兩者用量均為4％。制備工藝按

7、照以下步驟:(1)醇提:取處方骨碎補總酮藥材粉碎成粗顆粒(10目)，加入95％乙醇，提取3次，第1次2小時，第2次1小時，第3次40分鐘，趁熱過濾，合并醇液，回收乙醇濃縮成浸膏(相對密度1.23)備用。(2)基質的制備:取阿拉伯膠、西黃耆膠、壓敏膠、氧化鋅按加適量水溶脹，加熱使溶解，在50度水浴中，不斷攪拌，依次加入氧化鋅、以及氮酮、丙二醇和甘油三者混合物（氮酮、丙二醇、甘油在研缽中研均勻）混合均勻即得。(3)制膏及涂布:取中藥提取浸膏

8、與基質透皮劑在50度水浴恒溫加熱，攪拌20-40分鐘混合均勻，將其涂于無紡布上，蓋襯，剪成8*10大?。科嗨幹亓?0g）。
　　按以下制備工藝進行
　　巴布劑制備工藝主要包括基質成型工藝和制劑成型工藝初步制作骨碎補總酮巴布膏，基本過程如下。
　　主藥支持層背襯層↘↘↘基質→膏體層→涂布→裁剪→包裝→成品
　　結果:
　?。ㄒ唬┥锪W結果:(1)彈性比率:SD大鼠骨質疏松性骨折內固定術后2周時，阿侖膦酸

9、鈉和骨碎補總酮二者合用比單用骨碎補組可明顯增強其骨骼的彈性比率P=0.022;阿侖膦酸鈉組較對照組能增強骨骼彈性比率P＜0.05。(2)最大載荷:骨碎補總酮，阿侖膦酸鈉及二者合用均能在骨折固定術后4周時能有效改善骨質疏松大鼠股骨的最大載荷的生物力學性能，P＜0.05。
　　(二)骨痂測量結果:(1)骨折內固定術后2周時:骨碎補總酮組骨痂較對照組小P=0.007;與阿侖膦酸鈉組對比骨痂也較小P=0.004;與聯(lián)合用藥組相比骨痂也較小

10、P=0.027，說明骨碎補總酮的骨痂較其他組來說骨痂成熟較快，有促進骨折愈合作用。(2)骨折內固定術后4周時:阿侖膦酸鈉組與對照組比較，P=0.036;與骨碎補總酮組比較，P＜0.001;與聯(lián)合用藥組比較P=0.011，可以認為4周時阿侖膦酸鈉組形成的骨痂較其他組大，阿侖膦酸鈉的早期應用可能影響骨折的愈合，延長骨折的成熟，而骨碎補總酮組與對照組比較，P=0.005;與阿侖膦酸鈉組比較，P＜0.001;與聯(lián)合用藥組比較，P=0.015，可

11、以認為4周時骨碎補總酮組所形成的骨痂較其他組小進一步顯示了骨碎補總酮有促進骨痂成熟，促進骨折愈合的作用。(3)骨折內固定術后6周:各組之間差異均無顯著性意義，P＞0.05。
　?。ㄈ線讀片結果:骨折內固定術后2周時，骨折線均比較明顯，少許骨痂形成，但不明顯，與對照組相比各實驗組骨折端出現(xiàn)半透明帶。骨折內固定術后4周時x線顯示在阿侖膦酸鈉組，骨碎補總酮組及聯(lián)合用藥組中內外骨痂生長，骨折線開始變得模糊，骨折內固定術后6周時骨折線完

12、全消失，然而骨折內固定術后4周時對照組骨折線仍然明顯，但已經(jīng)開始出現(xiàn)半透明帶，6周時骨折線仍然未完全消失。
　?。ㄋ模┙M織學檢查結果:對照組和阿侖膦酸鈉組各期原始小梁狀骨表面及骨陷窩內破骨細胞數(shù)明顯較其他組少。骨碎補總酮組和聯(lián)合用藥組各期原始小梁狀骨表面成骨細胞及骨陷窩內破骨細胞數(shù)明顯較其他組多;軟骨性骨痂取代纖維骨加快，同時軟骨骨痂向骨性骨痂轉化也較快。
　?。ㄎ澹┲兴幇筒几嘌兄平Y果:經(jīng)過調制基質加入促透劑，以每克膏藥含9

13、mg骨碎補總酮和每克膏藥含27mg骨碎補總酮制得低劑量骨碎補總酮巴布膏和高劑量骨碎補總酮巴布膏2種劑型。
　　結論:
　　阿侖膦酸鈉和骨碎補總酮二者均能有效增加維甲酸所致的骨質疏松性SD大鼠的股骨的生物力學性能，包括骨的最大載荷，骨的壓縮剛度以及骨的彈性比率。骨碎補總酮能構促進維甲酸所致的骨質疏松性SD大鼠股骨骨折的骨愈合，加快骨痂的成熟。阿侖膦酸鈉和骨碎補總酮的聯(lián)合治療對維甲酸所致的骨質疏松性SD大鼠的骨折愈合和骨痂形成有

14、一種附加的效果。骨碎補總酮中藥巴布膏的初步研制是可行的，給骨碎補總酮外用提供一種新的劑型。
　　意義:
　　通過試驗我們進一步證實骨碎補總酮有利于促進骨質疏松性骨折的骨愈合，提高的骨生物力學強度，與阿侖膦酸鈉的合用有疊加效果。接著我們要研制成功了國內第一帖骨碎補總酮巴布膏制劑意義重大。
　　我國古代早已有“透皮給藥技術”即俗稱“狗皮膏藥”二者原理是一樣的，“狗皮膏藥”所存在的缺點是，貼劑達不到當今世界經(jīng)皮給藥技術的要求

15、:透皮性、粘貼性差、反復粘貼次數(shù)少、不親水、尤其嚴重的是透皮給藥的藥物利用率低并且對人體皮膚過敏。而新型、天然及合成高分子巴布劑基質平臺，避免了這些缺點，從而將成為未來醫(yī)藥界貼劑制作廣泛使用的載體。
　　從西藥巴布膏如氟比洛芬巴布膏近幾年在市場上的巨大成功來看，據(jù)有關機構預測，在未來的20～30年內，大約有30％以上的藥物將改成經(jīng)皮給藥制劑，勢必掀起一個內病外治的新高潮。而我國擁有豐富且療效確切的中藥貼敷劑資源和悠久的中醫(yī)外治法歷