氯吡格雷與替格瑞洛藥動(dòng)學(xué)影響因素的研究.pdf

1、第一部分分析急性冠脈綜合征患者體內(nèi)氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物的影響因素
　　目的：
　　分析影響急性冠脈綜合征（ACS）患者體內(nèi)硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物血漿濃度的主要因素。
　　方法：
　　105例ACS患者均給予阿司匹林100 mg·d-1及硫酸氫氯吡格雷75 mg·d-1，連續(xù)口服4 d；第5天晨起空腹給藥1 h后，抽取靜脈血4 mL，用乙二胺四乙酸抗凝。其中2 mL立即加入500 mmol·L-1的衍生化試劑2

2、-溴-3’-甲氧基苯乙酮（MPB）溶液20μL，用于檢測(cè)硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物的濃度；另2 mL用于熒光檢測(cè)細(xì)胞色素 P4502C19*2（CYP2C19*2）、*3和氧磷酶1（PON1）基因型。用單因素分析探索二分類變量及等級(jí)資料對(duì)硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物血藥濃度的影響，用Spearman分析探索硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物血藥濃度與連續(xù)性變量的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　糖尿病、高脂血癥、PON1攜帶、進(jìn)行冠狀動(dòng)脈介入

3、手術(shù)后與硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物血藥濃度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），β受體阻滯藥、他汀類藥物、血清白蛋白（ALB）與硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物的濃度呈正相關(guān)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　糖尿病、高脂血癥、PON1攜帶及進(jìn)行冠狀動(dòng)脈介入手術(shù)后等可減少硫酸氫氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物血藥濃度，而ALB以及合用β受體阻滯藥或他汀類藥物可增加其血藥濃度。
　　第二部分腸道菌群對(duì)硫酸氫氯吡格雷及其活性代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影

4、響
　　目的：
　　建立大鼠血漿中硫酸氫氯吡格雷及其活性代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS測(cè)定方法，并考察大鼠腸道菌群變化對(duì)其藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　方法：
　　色譜及質(zhì)譜條件：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-1 mM乙酸銨（含0.1‰的甲酸）（80∶20，V/V），流速1 mL·min-1，柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL，內(nèi)標(biāo)為鹽酸噻氯匹定。離子化方式：電噴霧離子化源（ES

5、I）；檢測(cè)方式：正離子模式；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；離子源噴射電壓：5500 V；離子源溫度：550℃；氣簾氣（CUR）壓力：25 psi；霧化氣NEB（GS1，N2）壓力：55 psi；輔助氣AUX（GS2， N2）壓力：50 psi；碰撞氣（CAD）壓力：4 psi；硫酸氫氯吡格雷的去簇電壓（DP）和碰撞能（CE）值分別為68 V和21 eV，活性代謝產(chǎn)物衍生物（CAMD）的DP和CE值分別為114 V和26 eV，鹽酸噻氯

6、匹定的DP和CE值分別為60 V和23 eV；用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z322.2→212.0（硫酸氫氯吡格雷），504.4→354.1（CAMD），264.2→154.1（鹽酸噻氯匹定）。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：24只SD大鼠隨機(jī)分為益生菌組、抗生素組和對(duì)照組，每組8只。分別灌胃雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌（0.8 g·kg-1）、阿莫西林克拉維酸鉀（125 mg·kg-1）和蒸餾水，連續(xù)7天，每天一次。第8天每只大鼠給予硫酸氫氯吡格雷

7、片（10 mg·kg-1），并于給藥前和給藥后5、10、20、30、45 min、1、1.5、2、4、6、8、10 h眼內(nèi)眥取血，于肝素抗凝離心管（含20μL125 mM2-溴-3’-甲氧基苯乙酮（MPB）衍生化試劑），立即渦旋30 s混勻，離心取上層血漿200μL，加入600μL含1.5 ng·mL-1內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液，渦旋1 min，10900 r·min-1離心5 min，取上清液10μL進(jìn)樣。采用DAS2.1.1軟件擬合大鼠的藥動(dòng)

8、學(xué)參數(shù)，使用SPSS21.0軟件對(duì)三組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P值小于0.05則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　益生菌組、抗生素組和對(duì)照組硫酸氫氯吡格雷的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t分別為（6.83±1.81）、（6.80±1.75）和（6.50±1.87）ng·h·mL-1；AUC0-∞分別為（12.11±4.90）、（11.67±5.75）和（13.94±6.68）ng·h·mL-1；Cmax分別為（3.25±

9、1.73）、（2.87±0.73）和（2.76±1.15）ng·mL-1；t1/2分別為（9.07±4.57）、（7.75±4.64）和（12.5±10.95）h；Tmax分別為（0.30±0.19）、（0.33±0.08）和（0.43±0.23） h；CL分別為（966.61±418.40）、（1000.34±366.34）和（836.05±303.94） L·（h·kg）-1；V分別為（11261.73±4270.92）、（9437

10、.67±2945.94）和（11655.10±5789.74）L·kg-1。
　　益生菌組、抗生素組和對(duì)照組CAMD的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t分別為（362.26±126.43）、（491.68±169.72）和（404.85±92.71）ng·h·mL-1；AUC0-∞分別為（404.85±92.71）、（1524.19±176.40）和（422.45±91.08） ng·h·mL-1； Cmax分別為（258.12±1

11、21.92）、（272.00±72.04）和（258.55±112.03） ng·mL-1；t1/2分別為（2.19±0.76）、（3.59±1.95）和（2.42±0.83）h；Tmax分別為（0.52±0.16）、（0.84±0.18）和（0.78±0.16）h；CL分別為（30.45±13.39）、（20.76±5.95）和（24.67±5.40）L·（h·kg）-1；V分別為（100.37±60.28）、（110.66±73.5

12、7）和（87.10±35.88）L·kg-1。
　　使用SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比益生菌組和抗生素組各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)建立了大鼠血漿中硫酸氫氯吡格雷及其活性代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS測(cè)定方法。藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明腸道菌群的變化對(duì)硫酸氫氯吡格雷及其代謝產(chǎn)物的藥代動(dòng)力學(xué)無影響。
　　第三部分腸道菌群對(duì)替格瑞洛在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響
　　目的：
　　建

13、立大鼠血漿中替格瑞洛的LC-MS/MS測(cè)定方法，并考察大鼠腸道菌群變化對(duì)替格瑞洛藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　方法：
　　色譜及質(zhì)譜條件：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-1‰的甲酸（80∶20，V/V），流速1 mL·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL，內(nèi)標(biāo)為布洛芬。離子化方式：電噴霧離子化源（ESI）；檢測(cè)方式：負(fù)離子模式；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；離子源噴射電壓：55

14、00 V；離子源溫度：600℃；氣簾氣（CUR）壓力：40 psi；霧化氣NEB（GS1，N2）壓力：55 psi；輔助氣AUX（GS2，N2）壓力：50 psi；碰撞氣（CAD）壓力：10 psi；替格瑞洛的解離電壓（DP）和碰撞能（CE）值分別為-111.36 V和-32.43 eV，布洛芬的DP和CE值分別為-49.61 V和-10.27 eV；用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z521.2→361.3（替格瑞洛），205.1→161

15、.1（布洛芬）。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：45只SD大鼠隨機(jī)分為益生菌組、抗生素組和對(duì)照組，每組15只。分別灌胃雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌（0.8 g·kg-1）、阿莫西林克拉維酸鉀（125 mg·kg-1）和蒸餾水，連續(xù)7天，每天一次。第8天每只大鼠給予替格瑞洛（18 mg·kg-1），并于給藥前和給藥后5、15、30 min、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼內(nèi)眥取血，于肝素抗凝離心管，離心取上層血漿200μL，加入600μL

16、含150 ng·mL-1內(nèi)標(biāo)的乙腈溶液，渦旋1 min，10900 r·min-1離心10 min，取上清液10μL進(jìn)樣。采用DAS2.1.1軟件擬合大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，使用SPSS21.0軟件對(duì)三組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P值小于0.05則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。。
　　結(jié)果：
　　益生菌組、抗生素組和對(duì)照組替格瑞洛的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：AUC0-t分別為（6336.24±1840.46）、（4444.05±1033.43）和（

17、4469.32±928.47） ng·h·mL-1；AUC0-∞分別為（6841.98±1975.95）、（4656.66±1083.78）和（4736.47±897.42） ng·h·mL-1； Cmax分別為（858.65±275.98）、（648.81±215.59）和（617.49±168.95）ng·mL-1；t1/2分別為（6.40±2.18）、（5.25±1.39）和（5.68±2.08）h；Tmax分別為（0.88±0.

18、23）、（0.90±0.21）和（1.30±0.59）h；CL分別為（2.82±0.72）、（4.07±0.99）和（3.95±0.91） L·（h·kg）-1；V分別為（26.07±12.00）、（31.45±14.65）和（32.95±14.17） L·kg-1。
　　使用 SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較益生菌組的AUC0-t、AUC0-∞和Cmax增大，Tmax和 CL減?。≒值均小于0.05）；抗生素組與