As2O3對(duì)L1210細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響.pdf

1、白血病，亦稱(chēng)作“血癌”，是一類(lèi)由造血干細(xì)胞異常引起的血液系統(tǒng)惡性疾病。白血病在我國(guó)總發(fā)病率約占5％，其患者數(shù)量在惡性腫瘤中居第8位，在惡性腫瘤引起的死亡率中居第6位，并且呈逐年上升的趨勢(shì)。20世紀(jì)70年代,哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的專(zhuān)家們創(chuàng)造性地將As2O3應(yīng)用于治療M3型急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL),之后又發(fā)展到治療維甲酸治療緩解后復(fù)發(fā)的M3型患者,完全緩解率達(dá)93%以上,已被公認(rèn)為M3型白血病治療首選藥物。一般認(rèn)為As2O3治療AP

2、L的主要機(jī)制是誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡，很少考慮其對(duì)細(xì)胞自噬的影響。本研究從As2O3對(duì)L1210細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響，探討其抗白血病的更可能的隱藏機(jī)制。
　　本研究采用MTT法及Brdu-Elisa法測(cè)定不同濃度As2O3對(duì)L1210細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)及AO／EB雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，AO染色及MDC染色檢測(cè)細(xì)胞自噬，免疫印跡法檢測(cè)增殖相關(guān)蛋白PCNA、凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、自噬相關(guān)蛋白LC3B的表達(dá)。另用苯誘導(dǎo)

3、的小鼠再生障礙性貧血模型檢測(cè)As2O3是否能刺激骨髓細(xì)胞的造血功能。
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：As2O3對(duì)L1210白血病細(xì)胞呈劑量、時(shí)間依賴性生長(zhǎng)抑制作用，24h、48h、72h半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為11.61μmol/L±0.05、3.34μmol/L±0.03、0.13μmol/L±0.08。As2O3作用24h,細(xì)胞凋亡率隨著 As2O3濃度的升高而升高，5、10、20μmol/L的凋亡率分別為26.52%±0.02

4、、30.99%±0.06、74.48%±0.05。AO／EB雙染法可觀察到細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，如細(xì)胞核濃縮、凋亡細(xì)胞表面膜出泡、體積變小、細(xì)胞破裂并出現(xiàn)凋亡小體等形態(tài)學(xué)特征，并呈劑量依賴性。AO染色及MDC染色可觀察到自噬陽(yáng)性顯色，且藥物濃度越高，陽(yáng)性率越高。Western-blot結(jié)果顯示：As2O3能上調(diào)自噬相關(guān)蛋白LC3B、促凋亡蛋白BAX的表達(dá)水平，使細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白PCNA、抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下降，并程劑量依賴性。